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孤啡肽及其受体基因在小鼠脂肪组织中表达的研究

作　者: 陈福伟
导　师: 杨国宇
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 小鼠脂肪组织 N/OFQ ORL1 能量代谢
分类号: S852.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

为了研究孤啡肽(Nociceptin /Orphanin FQ,简称N/OFQ)和孤啡肽受体(Opioid receptor like 1 receptor ,简称ORL1)基因在小鼠脂肪组织中表达情况,本文以小鼠的附睾部脂肪组织为研究对象,用半定量RT-PCR法初步探讨了N/OFQ和ORL1基因在脂肪组织中的表达,不同禁食时间对脂肪组织中N/OFQ和ORL1基因表达的变化规律,以及注射胰岛素和地塞米松对脂肪组织中N/OFQ和ORL1基因表达的影响。主要结果如下:一、N/OFQ和ORL1基因在脂肪组织中的表达。结果显示:N/OFQ和ORL1基因的RT-PCR产物电泳结果在364bp和563bp位置有特异性目的条带出现,从琼脂糖凝胶中回收纯化目的DNA片段,连接转化,测序,测序结果与电子克隆比对,发现得到的基因为小鼠N/OFQ和ORL1。结果表明,N/OFQ和ORL1基因在小鼠脂肪组织中均有表达。二、禁食不同时间对小鼠脂肪组织中N/OFQ和ORL1基因表达水平的影响。结果显示:1、禁食24h后,与对照组(即正常组)相比N/OFQ和ORL1基因表达水平均显著增加(P<0.05),约2倍左右;恢复喂食24小时后,与禁食组比较N/OFQ和ORL1基因表达水平有所下降,但仍没有恢复到对照组的水平;2、禁食36小时后,与对照组比较N/OFQ和ORL1基因表达水平有所升高,但差异不显著。三、激素对小鼠脂肪组织中N/OFQ和ORL1基因表达水平的影响。1、注射胰岛素后与禁食24小时组比较,N/OFQ和ORL1基因表达水平下降,但均不显著。2、注射地塞米松后与对照组相比,N/OFQ和ORL1基因表达水平显著下降(P<0.05)。

全文目录

致谢  4-8
摘要  8-9
1 文献综述  9-20
  1.1 脂肪组织分泌的主要脂肪因子  9-13
    1.1.1 瘦素  9-10
    1.1.2 脂肪酸结合蛋白  10
    1.1.3 趋化素  10
    1.1.4 促炎症反应脂肪因子  10-11
    1.1.5 脂联素  11
    1.1.6 内脂素  11-12
    1.1.7 抵抗素  12
    1.1.8 Vaspin  12-13
  1.2 孤啡肽及其受体的发现及其命名  13-15
    1.2.1 孤啡肽  13
      1.2.1.1 N/OFQ 的化学性质  13
      1.2.1.2 N/OFQ 的组织分布  13
      1.2.1.3 N/OFQ 与受体结合特征  13
    1.2.2 孤啡肽受体  13-15
      1.2.2.1 ORL1 的化学性质  14
      1.2.2.2 ORL1 的组织分布  14
      1.2.2.3 ORL1 的三维结构  14-15
  1.3 N/OFQ 与 ORL1 生物学功能  15-18
    1.3.1 N/OFQ 及 ORL1 与摄食及能量代谢的关系  15
    1.3.2 营养调控  15
    1.3.3 外源性 N/OFQ 及 ORL1 对动物摄食的影响  15
    1.3.4 能量相互作用平衡途径  15-16
    1.3.5 N/OFQ 和 ORL1 的其他生物学功能  16-18
      1.3.5.1 参与痛觉传导与调节  16-17
      1.3.5.2 对运动与行为的影响  17
      1.3.5.3 对生殖内分泌系统的影响  17
      1.3.5.4 对免疫功能的影响  17
      1.3.5.5 治疗酒精中毒的作用  17-18
      1.3.5.6 对学习和记忆的影响  18
  1.4 N/OFQ 及 ORL1 与其他激素间的相互关系  18
  1.5 ORL1 拮抗剂的研究进展  18-19
  1.6 展望  19-20
2 引言  20-21
3 材料和方法  21-26
  3.1 小鼠脂肪组织 N/OFQ 及 ORL1 mRNA 水平的检测  21-23
    3.1.1 试验动物  21
    3.1.2 主要仪器与试剂  21
    3.1.3 PCR 引物的设计及合成  21
    3.1.4 小鼠脂肪组织的分离  21
    3.1.5 小鼠脂肪组织总RNA 分离  21-22
    3.1.6 RT-PCR 反应  22-23
    3.1.7 PCR 产物回收  23
    3.1.8 DNA 序列测定  23
  3.2 禁食不同时间对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达水平的影响  23-24
    3.2.1 试验动物及分组  23
    3.2.2 主要试剂和仪器  23
    3.2.3 PCR 引物的设计及合成  23
    3.2.4 小鼠脂肪组织的分离  23
    3.2.5 小鼠脂肪组织总RNA 的提取  23-24
    3.2.6 小鼠脂肪组织总RNA 质量鉴定及浓度测定  24
    3.2.7 RT-PCR 反应  24
    3.2.8 PCR 产物回收  24
    3.2.9 数据统计  24
  3.3 胰岛素对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的影响  24-25
    3.3.1 试验动物及分组  24
    3.3.2 主要试剂和仪器  24
    3.3.3 PCR 引物的设计及合成  24
    3.3.4 小鼠脂肪组织的分离  24
    3.3.5.小鼠脂肪组织总 RNA 的提取  24
    3.3.6 RT-PCR 反应  24
    3.3.7 PCR 产物回收  24
    3.3.8 数据统计  24-25
  3.4 系列Ⅳ 地塞米松对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的影响  25-26
    3.4.2 主要试剂和仪器  25
    3.4.3 PCR 引物的设计及合成  25
    3.4.4 小鼠脂肪组织的分离  25
      3.4.4.1 小鼠脂肪组织总RNA 的提取  25
      3.4.4.2 小鼠脂肪组织质量鉴定及浓度测定  25
    3.4.5 RT-PCR 反应  25
    3.4.6 PCR 产物回收  25
    3.4.7 数据统计  25-26
4 结果与分析  26-33
  4.1 小鼠脂肪组织中 N/OFQ 及 ORL1 基因的表达  26-28
    4.1.1 小鼠 N/OFQ 基因的 RT-PCR 扩增及克隆  26
    4.1.2 小鼠 ORL1 基因的 RT-PCR 扩增及克隆  26-27
    4.1.3 条件优化  27-28
  4.2 禁食不同时间对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 及 ORL1 基因表达水平的影响  28-30
    4.2.1 禁食 24 小时对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 及 ORL1 的基因表达水平的影响  28-29
    4.2.2 禁食 36 小时对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 和 ORL1 的基因表达水平的影响  29-30
  4.3 激素对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 和 ORL1 基因表达水平的影响  30-33
    4.3.1 胰岛素对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 和 ORL1 的基因表达水平的影响  30-31
    4.3.2.地塞米松对小鼠脂肪组织中N/OFQ和ORL1的基因表达的影响  31-33
5 结果与讨论  33-35
  5.1 小鼠脂肪组织中 N/OFQ 及 ORL1 基因的表达  33
  5.2 禁食不同时间对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 及 ORL1 基因表达的影响  33-34
  5.3 胰岛素对小鼠脂肪组织中 N/OFQ 及 ORL1 基因的表达影响  34-35
  5.4 地塞米松对小鼠 N/OFQ 及 ORL1 基因的表达影响  35
6 结论  35-36
参考文献  36-42
Abstract  42-43
附: 发表论文  43

孤啡肽及其受体基因在小鼠脂肪组织中表达的研究

内容摘要

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