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食蟹猴—猪异种体细胞核移植体系的建立

作　者: 秦祖兴
导　师: 卢晟盛
学　校: 广西大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 食蟹猴 猪 异种核移植 胚胎发育 PZM-3 HECM-10 TSA VPA
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


食蟹猴-猪异种体细胞核移植(iSCNT)研究的主要目的是从iSCNT胚胎中获得具有与人类相似遗传背景的胚胎干细胞(ESCs),作为医学研究和科学研究的试验材料。iSCNT研究不仅可以支持人类治疗性克隆、灵长类早期胚胎发育和核移植过程中的核质互作、核重编程和表观遗传学等基础研究。同时,还可以为保护濒危动物,甚至是拯救已灭绝动物而进行的iSCNT提供参考。本研究主要内容和结果如下：1：优化食蟹猴-猪异种体细胞核移植(iSCNT)胚胎融合/激活参数,筛选出最佳的融合/激活条件；探讨以目前常用的猪胚胎培养基(NCSU-23和PZM-3)和灵长类培养基(HECM-10)培养iSCNT胚胎,以期筛选出适合iSCNT胚胎体外发育的胚胎培养基。结果表明,挑选直径20μm的食蟹猴耳部成纤维细胞(MEF)作为供体细胞时,采用2次电场强度为60 V/mm或80 V/mm,作用时间为30μs的直流脉冲可以获得最佳的融合/激活效果,并且获得的iSCNT胚胎可以发育到囊胚期。后续试验中,选择2次电场强度为80 V/mm,作用时间为30μs的直流脉冲进行iSCNT胚胎的融合/激活。PZM-3和HECM-10均可用于iSCNT胚胎体外培养。2：探讨两种组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(HDACi), Trichostatin A(TSA)和Valproic acid (VPA),处理对iSCNT胚胎发育的影响。结果表明,在PZM-3中,,添加10nM TSA处理48 h显著提高iSCNT胚胎囊胚率(P<0.05)。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
第一部分 文献综述  10-29
  前言  10
  1 异种体细胞核移植研究进展  10-12
  2 异种体细胞核移植研究中需要关注的问题  12-17
    2.1 核质相容性  12-14
    2.2 母源基因调控-合子型基因调控的转换  14-16
    2.3 线粒体的命运  16-17
  3 异种体细胞核移植的影响因素  17-26
    3.1 供体细胞  17-21
    3.2 受体胞质  21-22
    3.3 核移植操作  22-25
    3.4 胚胎培养系统  25-26
  4 异种体细胞核移植的应用前景  26-27
  5 食蟹猴-猪异种体细胞核移植研究的意义  27-29
第二部分 试验研究  29-55
  第一章 食蟹猴-猪异种体细胞核移植(iSCNT)融合/激活参数和胚胎培养基的优化  29-46
    1 材料和方法  31-35
    2 试验结果及分析  35-39
      2.1 试验一:融合/激活参数对iSCNT胚胎发育的影响  35-37
      2.2 试验二:不同培养基对猪孤雌胚胎体外发育的影响  37-39
      2.3 试验三:iSCNT胚胎在不同培养基中的发育情况  39
    3 讨论  39-45
    4 小结  45-46
  第二章 TSA和VPA处理对食蟹猴-猪异种体细胞核移植(iSCNT)胚胎发育的影响  46-55
    前言  46-47
    1 材料和方法  47
    2 试验结果及分析  47-51
      2.1 试验一:在PZM-3添加TSA处理48h对iSCNT胚胎发育的影响  47-48
      2.2 试验二:在PZM-3中添加TSA处理时长对iSCNT胚胎发育的影响  48-49
      2.3 试验三:在PZM-3中添加TSA处理iSCNT胚胎培养24和48h的发育情况  49
      2.4 试验四:在HECM-10中添加TSA处理48h对iSCNT胚胎发育的影响  49-50
      2.5 试验五:在PZM-3中添加VPA处理48h对iSCNT胚胎发育的影响  50-51
      2.6 试验六:在HECM-10中添加VPA处理48h对iSCNT胚胎发育的影响  51
    3 讨论  51-54
    4 小结  54-55
总结论  55-56
参考文献  56-70
致谢  70-72
攻读硕士学位期间发表论文情况  72

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中图分类: > 生物科学 > 生物工程学（生物技术） > 细胞工程
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