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RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌及胃癌细胞生物学行为的影响

作　者: 曾楷峰
导　师: 施瑞华
学　校: 南京医科大学
专　业: 消化内科
关键词: 食管鳞癌胃癌缺氧诱导因子-1α 血管生成拟态 RNA干扰
分类号: R735
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景:食管鳞癌和胃癌是我国常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率均居世界前列。大量研究表明缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)作为机体适应缺氧环境的关键调节因子,在恶性肿瘤的发生、发展中起关键作用。目前,HIF-1α已成为肿瘤发病机制和治疗研究方面的热点。HIF-1α在食管鳞癌及胃癌中均呈高表达,且与肿瘤血管生成、浸润和转移密切相关。血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)是由恶性肿瘤细胞而非血管内皮细胞围成的血管样结构,其参与了肿瘤的微循环。VM缓解了肿瘤内缺血缺氧微环境,也与肿瘤侵袭、转移及患者预后密切相关,并且使传统的抗肿瘤血管治疗效果不佳。HIF-1α的过表达可能与恶性肿瘤VM的形成有一定联系。目的:1.观察人食管鳞癌细胞株Eca-109、TE13及胃癌细胞株SGC-7901能否形成血管生成拟态(VM)结构。2.探讨RNA干扰沉默HIF-1α对人食管鳞癌及胃癌细胞体外增殖、迁移及VM形成的影响。方法:1.将重组质粒pGCsi-shHIF-1α及对应空质粒稳定转染人胃癌细胞SGC-7901。2.Eca-109、Eca-109/Neo、Eca-109/shRNA、TE13、TE13/Neo、TE13/shRNA、SGC-7901、SGC-7901/Neo及SGC-7901/shRNA细胞分别进行常氧及缺氧培养12h。应用Western blot检测常氧及缺氧情况下各组稳转细胞HIF-1α的抑制效果。3.细胞常规培养,平板克隆形成实验和MTT法检测各组细胞的增殖活性。4.取对数生长期的各组细胞1×105加入Transwell培养皿上室,下室加入600μl含10%胎牛血清的DMEM培养液。分别置于常氧、缺氧培养24h,计算迁徙细胞数。5.取24孔培养板每孔加入300μl Matrigel原液,待其凝固,每孔内接种1ml浓度为5×105/ml的各组细胞悬液,分别置于常氧及缺氧条件下培养12h。观察并计数各组细胞的管状结构数量。结果:1.常氧及缺氧情况下,转染了重组质粒的Eca-109、TE13及SGC-7901细胞,HIF-1α蛋白表达均被显著抑制(P<0.01)。2.与对照组相比,各重组质粒转染组细胞的克隆形成能力显著降低(P<0.05),增殖活性被显著抑制(P<0.05)。3.常氧和缺氧情况下,各稳转组肿瘤细胞穿膜细胞数均显著减少(P<0.01)。缺氧后各未转染组细胞穿膜细胞数增多,差异有统计学意义(P<0.05)。提示缺氧可促进肿瘤细胞迁移。4.Eca-109、TE13及SGC-7901细胞均可形成典型的管网状结构,且缺氧后数目明显增加(P<0.05),各重组质粒转染组细胞常氧及缺氧情况下管状形成能力均被明显抑制(P<0.01)。结论:1.pGCsi-shHIF-1α质粒能有效沉默Eca-109、TE13及SGC-7901细胞HIF-1α的表达。2.RNA干扰沉默HIF-1α能有效抑制Eca-109、TE13及SGC-7901细胞克隆形成能力及增殖活性。3.缺氧可促进Eca-109、TE13及SGC-7901细胞迁移,沉默HIF-1α能有效抑制肿瘤细胞的体外迁移能力。4.Eca-109、TE13及SGC-7901细胞均可形成血管生成拟态结构。沉默HIF-1α能有效抑制肿瘤细胞体外VM形成。

全文目录

一、英文缩略词表  4-5
二、中文摘要  5-8
三、英文摘要  8-11
四、论文正文  11-38
  引言  11-12
  材料与方法  12-22
  结果  22-33
  讨论  33-37
  小结  37-38
五、参考文献  38-44
六、综述与参考文献  44-59
七、文章发表情况  59-60
八、致谢  60

RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌及胃癌细胞生物学行为的影响

内容摘要

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