学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

刺参（Apostichopus japonicus）肠道益生菌的应用研究

作　者: 周慧慧
导　师: 马洪明
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产养殖
关键词: 刺参益生菌生长免疫抗病力
分类号: S917.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 185次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

益生菌作为一种高效安全的疾病防治途径在水产养殖中得到广泛的应用。本研究对分离自刺参肠道的3株弧菌拮抗菌进行分类鉴定和安全性检验,筛选出2株安全的刺参潜在益生菌。通过稚参期刺参养殖中潜在益生菌的应用效果研究初步验证了潜在益生菌的益生效果。比较研究了不同形式不同浓度的益生菌对刺参生长、免疫和抗病力的影响,对益生菌的最佳使用方式和作用机理进行了探讨,为刺参肠道益生菌在刺参养殖中的应用提供了理论依据。首先采用16SrDNA序列分析法将3株弧菌拮抗菌分别鉴定为Bacillus sp.(GSC-1)、Bacillus sp.(GSC-2)和Enterococcus sp. (GSC-3),然后结合菌株对10大类17种常用抗生素的药敏性和对稚参期刺参的毒害性评价了3株弧菌拮抗菌的安全性。药敏性检测结果显示3株拮抗菌均对50%以上常用抗生素敏感。分别以103、105或107CFU/ml的GSC-1、GSC-2、GSC-3或灿烂弧菌浸浴稚参以检验拮抗菌对稚参期刺参的安全性,7d后各弧菌拮抗菌浸浴组的稚参成活率均高于同浓度的灿烂弧菌处理组；GSC-1和GSC-3在实验浓度下对稚参成活率无显著影响(P>0.05),可作为稚参的潜在益生菌；107CFU/mlGSC-2浸浴组稚参的成活率显著低于对照组(P<0.05),因此GSC-2不适合作为稚参的潜在益生菌。通过研究潜在益生菌株GSC-1和GSC-3对稚参期刺参生长、免疫和抗病力的影响,初步探讨了GSC-1和GSC-3的益生效果。将潜在益生菌GSC-1和GSC-3以109CFU/g的比例与鼠尾藻粉混合后饲养稚参20 d,潜在益生菌处理组的稚参成活率、特定生长率和变色率均高于对照组,其中GSC-1处理组稚参的成活率和变色率显著提高(P<0.05),而GSC-3处理组稚参的成活率和特定生长率显著提高(P<0.05)；与对照组相比,潜在益生菌GSC-1和GSC-3均有效增加了稚参的总菌数(P<0.05),GSC-1还有效降低了稚参的弧菌数(P<0.05)；潜在益生菌GSC-1和GSC-3均可显著提高稚参体组织中的酚氧化酶和溶菌酶活力(P<0.05),GSC-1亦显著提高了其酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力(P<0.05)；GSC-1和GSC-3处理组稚参的抗灿烂弧菌感染能力均高于对照组,其中GSC-3显著降低了灿烂弧菌攻毒后稚参的死亡率(P<0.05)。研究结果表明,潜在益生菌GSC-1和GSC-3能够促进稚参的健康生长并提高其抗病能力,因而GSC-1和GSC-3均可作为益生菌应用于稚参养殖中。本论文分别对益生菌GSC-1和GSC-3的作用机理和最佳使用方式进行了研究探讨。以初始体重为(4.120±0.120)g的刺参为研究对象,在室内循环水系统中进行8周的养殖实验,研究在基础饲料中分别添加不同剂量(107CFU/g或109CFU/g)和不同形式(活菌或热灭活菌)的芽孢杆菌属益生菌GSC-1对刺参特定生长率、肠道菌群、免疫力及抗病力的影响,以期寻找益生菌GSC-1的最佳使用方式并探讨其作用机理。实验结果表明：饲料中添加109 CFU/g的益生菌GSC-1可以显著提高刺参的特定生长率(P<0.05),而饲料中107 CFU/g活菌或灭活菌的添加对刺参特定生长率均无显著影响(P>0.05)；益生菌GSC-1以活菌形式添加在饲料中不仅显著增加了刺参肠道总菌数(P<0.05),而且显著减少了刺参肠道弧菌数(P<0.05),灭活菌的添加对刺参肠道总菌数和弧菌数影响均不显著(P>0.05)；与对照组相比,饲料中益生菌GSC-1的添加激活了刺参的免疫系统,其中刺参体腔细胞的呼吸爆发活性和吞噬活性以及体腔细胞破碎液上清中的酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性均以109 CFU/g活菌组最高；益生菌GSC-1可以提高刺参抵抗灿烂弧菌感染的能力,活菌添加组的刺参发病率显著降低(P<0.05),其中109 CFU/g活菌添加组的发病率最低。上述结果表明,益生菌GSC-1可以改善刺参的肠道微生态环境并提高其免疫力,并以此促进刺参的生长和抗病力。本实验条件下,益生菌GSC-1以109 CFU/g活菌形式添加在饲料中效果最佳。以初始体重为(4.094±0.057)g的刺参为研究对象,在室内循环水系统中进行8周的养殖实验,研究在基础饲料中分别添加不同剂量(107 CFU/g或109CFU/g)和不同形式(活菌或热灭活菌)的益生菌GSC-3对刺参特定生长率、肠道菌群、免疫酶活力及抗病力的影响,以期寻找益生菌GSC-3的最佳添加形式和添加剂量,并探讨其作用机理。实验结果表明：饲料中添加益生菌GSC-3可以提高刺参的特定生长率,109 CFU/g活菌和灭活菌添加组的刺参特定生长率显著升高(P<0.05)；益生菌GSC-3影响了刺参肠道微生态环境,活菌形式的添加不仅显著增加了刺参肠道总菌数(P<0.05),而且显著减少了刺参肠道弧菌数(P<0.05),灭活形式益生菌GSC-3的添加仅显著增加了刺参肠道总菌数(P<0.05)；饲料中益生菌GSC-3的添加激活了刺参的免疫系统,109 CFU/g灭活菌添加组刺参的体腔细胞密度、呼吸爆发活性、吞噬活性以及体腔细胞破碎液上清中的酚氧化酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性在各处理组中最高；益生菌GSC-3提高了刺参抵抗灿烂弧菌感染的能力,灭活菌添加组和109 CFU/g活菌添加组的发病率显著降低(P<0.05),107 CFU/g灭活菌添加组的发病率最低,但与109 CFU/g灭活菌添加组差异不显著。上述结果表明,灭活益生菌GSC-3虽然不能有效降低刺参肠道弧菌数目,却可以与活菌添加组同样程度地促进刺参生长,并且可以比活菌添加组更好地激活刺参的免疫系统,提高刺参抵抗灿烂弧菌感染的能力,还可以消除未灭活肠球菌使用带来的安全性问题,因此益生菌GSC-3以灭活菌形式添加在饲料中最佳。本实验条件下,益生菌GSC-3以109CFU/g灭活菌形式添加在饲料中效果最佳。综上所述,本实验筛选得到的两株刺参养殖用益生菌,可以有效地促进稚参期刺参和幼参期刺参的健康生长和抗病力,为刺参专用益生菌的开发提供了理论依据,为益生菌在刺参养殖中的推广应用奠定了基础。

全文目录

摘要  10-13
Abstract  13-16
第一章文献综述益生菌在海洋无脊椎动物中的应用研究进展  16-29
  0 前言  16
  1 益生菌的基础理论研究  16-19
    1.1 益生菌的定义  16-17
    1.2 益生菌的筛选  17-18
    1.3 益生菌的主要作用机制  18-19
  2 无脊椎动物免疫系统研究进展  19-20
    2.1 贝类免疫系统  19
    2.2 虾类免疫系统  19-20
    2.3 棘皮动物的免疫系统  20
  3 益生菌在海洋无脊椎动物养殖中的应用研究  20-27
    3.1 益生菌在贝类养殖中的应用研究  20-23
      3.1.1 益生菌在牡蛎养殖中的应用  21
      3.1.2 益生菌在扇贝养殖中的应用  21-22
      3.1.3 益生菌在鲍鱼养殖中的应用  22-23
    3.2 益生菌在节肢动物养殖中的应用研究  23-26
      3.2.1 益生菌在对虾养殖中的应用  23-25
      3.2.2 益生菌在蟹类养殖中的应用研究  25-26
    3.3 益生菌在刺参养殖中的应用研究  26-27
  4 目前益生菌使用过程中的主要问题和前景展望  27-28
  5 本研究的目的和意义  28-29
    5.1 研究目的  28
    5.2 研究意义  28-29
第二章三株刺参肠道弧菌拮抗菌的鉴定与安全性检验  29-41
  0 前言  29-30
  1 材料与方法  30-33
    1.1 主要试剂与仪器  30
    1.2 拮抗菌的来源与培养  30
    1.3 拮抗菌株的鉴定与系统发育分析  30-31
    1.4 细菌生长曲线的制作  31-32
    1.5 拮抗菌的药敏性检验  32
    1.6 拮抗菌的毒性检验  32-33
      1.6.1 毒性检验方法  32
      1.6.2 毒性检验结果数理统计  32-33
  2 结果  33-34
    2.1 潜在益生菌株的鉴定  33
    2.2 细菌的生长曲线  33
    2.3 拮抗菌的药敏性检验  33-34
    2.4 拮抗菌的毒性检验  34
  3 讨论  34-41
第三章刺参肠道潜在益生菌对稚参生长、免疫及抗病力的影响  41-52
  0 前言  41
  1 材料与方法  41-44
    1.1 实验饲料的制备  42
    1.2 实验设计  42
    1.3 样品采集  42-43
    1.4 攻毒实验  43
    1.5 稚参细菌学分析  43
    1.6 免疫指标的测定  43-44
    1.7 数据统计  44
  2 实验结果  44-45
    2.1 成活率、特定生长率和变色率  44
    2.2 灿烂弧菌攻毒后成活率  44
    2.3 潜在益生菌对稚参总菌数和弧菌数的影响  44-45
    2.4 潜在益生菌对稚参免疫酶指标的影响  45
  3 讨论  45-52
第四章饲料中益生菌Bacillus GSC-1的添加对刺参生长、肠道菌群、免疫指标及抗病力的影响  52-67
  0 前言  52-53
  1 材料和方法  53-57
    1.1 实验用细菌的制备  53
    1.2 实验饲料的制作  53-54
    1.3 实验动物与饲养管理  54
    1.4 生长指标的测定  54
    1.5 肠道菌群的分析  54-55
    1.6 免疫指标的测定  55-57
      1.6.1 样品的采集与处理  55
      1.6.2 血细胞计数  55
      1.6.3 吞噬活性测定  55
      1.6.4 呼吸爆发活力测定  55-56
      1.6.5 酚氧化酶活力(PO)测定  56
      1.6.6 酸性磷酸酶活力(ACP)测定  56
      1.6.7 超氧化物歧化酶活力(SOD)测定  56
      1.6.8 蛋白含量(PC)的测定  56-57
    1.7 攻毒实验  57
    1.8 统计分析  57
  2 结果  57-58
    2.1 饲料中益生菌GSC-1的添加对刺参特定生长率的影响  57
    2.2 饲料中益生菌GSC-1的添加对刺参肠道总菌数和弧菌数的影响  57-58
    2.3 饲料中益生菌GSC-1的添加对刺参免疫指标的影响  58
    2.4 饲料中益生菌GSC-1的添加对刺参抵抗灿烂弧菌感染能力的影响  58
  3 讨论  58-67
第五章饲料中添加益生菌Enterococcus GSC-3对刺参生长、肠道菌群、免疫指标及抗病力的影响  67-81
  0 前言  67-68
  1 材料和方法  68-72
    1.1 实验用细菌的制备  68
    1.2 实验饲料的制作  68-69
    1.3 实验动物与饲养管理  69
    1.4 生长指标的测定  69
    1.5 肠道菌群的分析  69-70
    1.6 免疫指标的测定  70-72
      1.6.1 样品的采集与处理  70
      1.6.2 血细胞计数  70
      1.6.3 吞噬活性测定  70
      1.6.4 呼吸爆发活力测定  70-71
      1.6.5 酚氧化酶活力(PO)测定  71
      1.6.6 酸性磷酸酶活力(ACP)测定  71
      1.6.7 超氧化物歧化酶活力(SOD)测定  71
      1.6.8 蛋白含量(PC)的测定  71-72
    1.7 攻毒实验  72
    1.8 统计分析  72
  2 结果  72-73
    2.1 饲料中益生菌GSC-3的添加对刺参特定生长率的影响  72
    2.2 饲料中益生菌GSC-3的添加对刺参肠道总菌数和弧菌数的影响  72-73
    2.3 饲料中益生菌GSC-3的添加对刺参免疫指标的影响  73
    2.4 饲料中益生菌GSC-3的添加对刺参抵抗灿烂弧菌感染能力的影响  73
  3 讨论  73-81
参考文献  81-92
致谢  92-93

刺参（Apostichopus japonicus）肠道益生菌的应用研究

内容摘要

全文目录

相似论文