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高速逆流色谱分离制备甘草抗血管生成活性成分的研究

作　者: 王祖林
导　师: 刘秀河；刘可春
学　校: 山东轻工业学院
专　业: 制糖工程
关键词: 高速逆流色谱 甘草 成分分离 斑马鱼 血管生成 活性筛选
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


血管生成对肿瘤的生长、转移起到关键作用。以血管生成为靶点的抗肿瘤策略是抗肿瘤领域的研究热点,目前已经发现许多天然和化学合成的抗血管生成药物。甘草(Licorice)是豆科甘草属(Glycyrrhiza)植物的根和根茎,是世界上常用的中药之一。已有研究发现甘草有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种活性,但其抑制血管生成的作用和机制尚不明确。本研究采用斑马鱼抗血管生成模型对甘草提取物进行筛选,利用高速逆流色谱对甘草中的抗血管生成活性成分进行追踪分离和结构鉴定。首先将甘草的70%乙醇提取物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到4部分。然后将这些部分利用斑马鱼抗血管生成筛选模型进行活性筛分,结果表明乙酸乙酯部分有较好的药理活性。采用聚酰胺柱色谱将甘草乙酸乙酯部位进一步分成Fr1～Fr7七个部分,斑马鱼抗血管生成模型检测表明,Fr5和Fr6有较好的药理活性。利用高速逆流色谱对Fr5和Fr6中的化学成分进行分离,从中得到12个单体成分,鉴定了其中的5个化合物,分别为异甘草素、异甘草黄酮醇、licocoumarone、glyurallin A、glyurallin B。利用高速逆流色谱对Fr1～Fr4的化学成分进行分离,从中得到8个单体成分,鉴定了其中的5个化合物,分别为:甘草苷、芒柄花苷、异甘草苷、甘草素、芒柄花素。利用斑马鱼抗血管生成筛选模型对Fr5和Fr6中的化学成分进行检测,结果表明异甘草素和异甘草黄酮醇有较好的抑制肿瘤血管生成活性,浓度在10μg/mL时对血管的抑制率为100%。

全文目录


摘要  9-10
ABSTRACT  10-11
第1章 绪论  11-19
  1.1 甘草的化学成分  11-17
    1.1.1 三萜皂苷类  11-15
    1.1.2 黄酮类  15-17
  1.2 甘草的药理作用  17-18
    1.2.1 抗肿瘤作用  17
    1.2.2 抗病毒作用  17-18
    1.2.3 其他作用  18
  1.3 小结  18-19
第2章 高速逆流色谱在天然产物成分分离中的应用  19-23
  2.1 高速逆流色谱技术简述  19-21
    2.1.1 高速逆流色谱仪及其工作原理  19-20
    2.1.2 高速逆流色谱的优点  20
    2.1.3 高速逆流色谱的溶剂系统及其选择  20-21
  2.2 高速逆流色谱在天然产物分离中的应用  21-23
    2.2.1 黄酮类  21
    2.2.2 生物碱类  21-22
    2.2.3 萜类  22-23
第3章 甘草抗血管生成有效部位的初筛  23-29
  3.1 材料与设备  24
    3.1.1 实验材料  24
    3.1.2 仪器设备  24
  3.2 实验方法  24-26
    3.2.1 样品溶液的配制  24-25
    3.2.2 胚胎的准备  25
    3.2.3 胚胎的处理  25
    3.2.4 施药  25
    3.2.5 结果观察  25
    3.2.6 甘草活性部位的提取分离  25-26
    3.2.7 数据处理  26
  3.3 结果与讨论  26-28
    3.3.1 甘草各部分浸膏的抗血管生成活性  26-27
    3.3.2 聚酰胺树脂柱各洗脱流分的抗血管生成活性  27-28
  3.4 小结  28-29
第4章 高速逆流色谱分离 Fr5、Fr6 中有抗血管生成活性的成分  29-47
  4.1 高速逆流色谱分离Fr5 中的主要成分  29-37
    4.1.1 材料与设备  29
    4.1.2 实验方法  29-30
    4.1.3 结果和讨论  30-37
  4.2 高速逆流色谱分离Fr6 中的主要成分  37-44
    4.2.1 材料与设备  37
    4.2.2 实验方法  37-38
    4.2.3 结果和讨论  38-44
  4.3 小结  44-47
第5章 高速逆流色谱分离 F1、Fr2、Fr3、Fr4 中的主要成分  47-69
  5.1 高速逆流色谱分离Fr1 中的主要成分  47-50
    5.1.1 材料与设备  47
    5.1.2 实验方法  47-48
    5.1.3 结果和讨论  48-50
  5.2 高速逆流色谱分离Fr2 中的主要成分  50-54
    5.2.1 材料与设备  50-51
    5.2.2 实验方法  51
    5.2.3 结果和讨论  51-54
  5.3 高速逆流色谱分离Fr3 中的主要成分  54-60
    5.3.1 材料与设备  54
    5.3.2 实验方法  54-55
    5.3.3 结果和讨论  55-60
  5.4 高速逆流色谱分离Fr4 中的主要成分  60-66
    5.4.1 材料与设备  60-61
    5.4.2 实验方法  61-62
    5.4.3 结果和讨论  62-66
  5.5 小结  66-69
第6章 Fr5 和 Fr6 中抗血管生成活性单体化合物的确证  69-75
  6.1 材料与设备  69-70
    6.1.1 实验材料  69
    6.1.2 仪器设备  69-70
  6.2 实验方法  70-71
    6.2.1 样品溶液的配制  70
    6.2.2 胚胎的准备  70
    6.2.3 胚胎的处理  70
    6.2.4 施药  70
    6.2.5 结果观察  70
    6.2.6 数据处理  70-71
    6.2.7 碱性磷酸酶血管染色  71
  6.3 结果与讨论  71-73
    6.3.1 Fr5 和Fr6 中各化合物的抗血管生成活性  71-72
    6.3.2 异甘草素和异甘草黄酮醇的浓度对血管生成的影响  72-73
  6.4 小结  73-75
第7章 结论与展望  75-77
  7.1 结论  75-76
  7.2 展望  76-77
参考文献  77-83
致谢  83-85
附录  85-107
在学期间主要科研成果  107
  一、发表学术论文  107
  二、其它科研成果  107

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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