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中药耐药抑制剂筛选及耐药抑制机理研究

作　者: 李俊超
导　师: 刘湘新
学　校: 湖南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 中药耐药抑制剂耐药金葡菌耐药抑制机理
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

随着抗生素的大量使用,金黄色葡萄球菌的耐药性问题也日益严重,出现了耐药菌株及多重耐药株。为了解决细菌的耐药问题,开发耐药抑制剂成为了人们关注的焦点。中药具有毒副作用小、有效成分多等优势。因此,本研究综合各方面的资料,力图从中药中筛选耐药抑制剂,并选用抑菌作用最强的中药初步进行耐药抑制机理研究。本研究采用镜检、生化特性鉴定、动物接种鉴定等方法,对试验用耐药金葡菌进行了鉴定,结果表明,试验所用细菌为革兰氏阳性金黄色葡萄球菌,无杂菌污染。采用药敏纸片法及微量稀释法测定14种抗菌药物对5株耐药菌的抑菌作用强度。参照NCCLS判断标准,结果证实试验所用金葡菌对9种抗菌药均表现耐药。并通过耐药诱导培养,得到了对诺氟沙星耐药性较高的耐药金葡菌。应用水提取法与醇提取法对11种中药进行有效成分粗提,采用药敏纸片法、微量稀释法测定其对耐药金葡菌的体外抑菌作用,并选用抑菌作用较强的中药进行耐药抑制试验。结果表明黄连提取物对耐药金葡菌抑菌作用及耐药抑制作用均最强；抑菌圈直径最高为27.25±2.1mm,最低抑菌浓度可达3.9mg/ml,抑制率达27%。挖孔试验及药敏纸片法试验均表明黄连提取物能够增强细菌对抗菌药的敏感性,具有耐药逆转作用。利用荧光分光光度计,在发射波长468nm,激发波长282nm处测定菌体内诺氟沙星药物的蓄积浓度。试验结果表明：黄连提取物处理后,试验组菌体内诺氟沙星蓄积浓度明显高于空白组(P<0.01),说明黄连具有促进菌体内药物蓄积的作用。采用SDS-PAGE电泳法、荧光分光光度法分别测定黄连提取物作用前后菌体蛋白图谱的变化及对耐药菌细胞外液中某些酶活性的影响,结果显示,黄连提取物能使5株耐药菌在35KDa-38Kda范围内的蛋白恢复表达,而对耐药金葡菌细胞外液中酶活性无影响(P>0.05),说明黄连提取物不影响耐药金葡菌细胞膜的通透性。以上结果表明：黄连对细菌的耐药抑制作用是多种化学成分、多种机制共同作用的结果,开发中药耐药抑制剂是缓解日益严重的细菌耐药性的有效途径。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章综述  11-24
  1 金黄色葡萄球菌耐药机理研究进展  11-16
    1.1 金黄色葡萄球菌的耐药机理  11-14
    1.2 防治对策  14-16
  2 中药耐药抑制剂研究进展  16-22
    2.1 几种初选中药的药理作用  16-20
    2.2 中药对耐药菌抑菌作用  20-21
    2.3 中药的耐药消除作用  21-22
  3 研究目的与意义  22-24
第二章金黄色葡萄球菌耐药菌株的鉴定  24-34
  1 材料与方法  24-28
    1.1 材料  24-25
    1.2 方法  25-28
  2 结果与分析  28-32
    2.1 金黄色葡萄球菌鉴定结果  28-32
  3 讨论  32-33
    3.1 细菌耐药性产生的原因  32
    3.2 金葡菌鉴定  32
    3.3 耐药性检测  32-33
  4 小结  33-34
第三章预选中药的体外抑菌与耐药抑制作用研究  34-46
  1 材料与方法  34-37
    1.1 材料  34-35
    1.2 方法  35-37
  2 结果与分析  37-42
    2.1 金葡菌对诺氟沙星耐药性诱导  37-38
    2.2 不同中药提取物对耐药金葡菌药敏试验结果  38
    2.3 最低抑菌浓度(MIC)测定结果  38-39
    2.4 耐药性抑制试验结果  39-42
  3 讨论  42-45
    3.1 中药耐药抑制剂的筛选  42-43
    3.2 中药抑菌成分  43
    3.3 中药与抗菌药协同作用  43-44
    3.4 不同方法对试验结果的影响  44
    3.5 中药提取物抑制耐药金葡菌的耐药性  44-45
  4 小结  45-46
第四章黄连提取物耐药抑制作用机理研究  46-58
  1 材料与方法  46-50
    1.1 试验材料  46-47
    1.2 试验方法  47-48
    1.3 黄连对耐药金葡菌蛋白表达的影响  48-49
    1.4 酶活性的测定  49-50
    1.5 数据处理  50
  2 结果与分析  50-54
    2.1 药物蓄积动力学试验结果  50-53
    2.2 细菌蛋白质SDS-PAGE电泳试验结果  53-54
    2.3 酶活性测定试验结果  54
  3 讨论  54-56
    3.1 诺氟沙星蓄积动力学分析  54-55
    3.2 细菌蛋白质SDS-PAGE电泳图谱分析  55-56
    3.3 酶活性测定结果分析  56
  4 小结  56-58
结论  58-59
参考文献  59-65
致谢  65-66
作者简介  66

中药耐药抑制剂筛选及耐药抑制机理研究

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