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RNAi联合CTLA4-Ig阻断B7/CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中抗排斥作用的研究

作　者: 孙军刚
导　师: 章志翔；王炜
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: CTLA4-Ig RNA干扰树突状细胞心脏移植免疫耐受
分类号: R654.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：观察CTLA4Ig联合shRNA阻断树突细胞B7/CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中的抗排斥作用,并探讨其抗排斥机制。方法：采用培养基细胞因子选择法体外培养小鼠骨髓来源DC,应用已构建的针对B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的shRNA质粒载体pB7shRNA转染DC,流式细胞仪检测转染前后DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表达水平：建立小鼠异位心脏移植模型,设置A组(异系对照组)、B组(未转染DC组)、C组(转染DC组)、D组(CTLA4-Ig治疗组)、E组(未转染DC+ CTLA4-Ig治疗组)、F组(转染DC+ CTLA4-Ig治疗组)。观察各组移植心脏存活时间,评定术后7天移植物排斥反应病理分级,以荧光实时定量PCR检测移植物中IL-2mRNA表达水平。结果：经过体外培养,每只小鼠可获得1.5-2×107个骨髓来源DC,细胞具备典型树突状结构,pB7shRNA质粒载体转染DC后经流式细胞仪检测其表面抗原CD80、CD86表达变化由93.57%、70.07%分别下降至30.83%、40.06%,而MHCⅡ、CD11c表达无明显变化。与异系对照组和未转染DC组相比,转染DC+CTLA4-Ig治疗组移植心脏存活时间明显延长(中位生存期25天vs 8天和8天,P=0.001)；排斥反应病理分级明显降低(x2=30.602, P=0.000); IL-2mRNA表达明显降低(P=0.000); IL-2mRNA表达与排斥反应病理分级呈明显正相关(r=0.942,P=0.000)。结论：pB7shRNA可显著抑制小鼠骨髓DC B7表达。术前输注pB7shRNA转染DC联合术后应用CTLA4-Ig对同种异系小鼠心脏移植有明显的抗排斥作用,其机制可能为pB7shRNA转染DC及CTLA4-Ig联合阻断B7／CD28共刺激通路,诱导异系受体T淋巴细胞无能。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-8
缩略语/符号说明  8-10
前言  10-13
  研究现状、成果  10-12
  研究目的、方法  12-13
对象和方法  13-28
  1 实验材料和对象  13-16
  2 原理和方法  16-28
结果  28-41
  1 小鼠骨髓DC的培养与鉴定  28-30
  2 pB7shRNA质粒扩增提纯  30
  3 pB7shRNA质粒载体转染DC效应检测  30-32
  4 小鼠异位心脏移植模型  32
  5 联合转染DC+CTLA4-Ig治疗对移植物生存期的影响  32-34
  6 移植物病理学检查  34-37
  7 联合转染DC+CTLA4-Ig治疗对移植心脏IL-2mRNA表达水平的影响  37-40
  8 IL2表达水平与排斥病理分级相关分析  40-41
讨论  41-52
结论  52-53
参考文献  53-59
发表论文和参加科研情况说明  59-60
综述  60-69
  CTLA4-Ig诱导免疫耐受的机制及应用进展  60-66
  综述参考文献  66-69
致谢  69

RNAi联合CTLA4-Ig阻断B7/CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中抗排斥作用的研究

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