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氟化物对家蚕细胞色素P450影响的研究

作　者: 柳照应
导　师: 朱勇
学　校: 西南大学
专　业: 遗传学
关键词: 家蚕 氟中毒 耐氟性 细胞色素P450 b5
分类号: S884
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


细胞色素P450酶系又称作多功能氧化酶系(MFO),它对内源物质的代谢与降解或外源化合物的活化与降解等进行催化和调控。昆虫中的细胞色素P450作用涉及生长、发育、取食等过程,对异生物质的代谢特性导致昆虫对杀虫剂的抗性,还参与昆虫的体内保幼激素、蜕皮激素和脂肪酸等内源化合物的合成与代谢。氟化物对家蚕健康有影响,严重时出现死亡。目前尚未明确家蚕耐氟机制,在探索家蚕耐氟机制的道路上还需要做大量的工作,本研究以家蚕耐氟品系T6和敏感品系734为研究材料,在家蚕五龄不同时期不同添氟处理后分析其对细胞色素P450的影响,并对五龄期的血液做了SDS-PAGE电泳图谱,本论文主要的研究结果如下:1.调查T6和734对氟化物的耐受能力对T6和734的四龄时期氟敏指数进行调查,对五龄期运用生理指标,主要以体重指数和死亡率的变化,死亡时体色的比较,评估了家蚕两个品系耐氟力,证明了家蚕T6品系具有很强的耐氟能力。2.氟化物对家蚕细胞色素P450的影响在五龄起蚕时,对T6和734分别添食不同浓度的氟化物,然后对五龄24h-168h各时期的细胞色素P450和b5的含量进行测定,每组设3个重复,对数据进行方差分析,表明家蚕T6F2、T6F4的细胞色素P450含量比T6DZ高出3-4倍,而T6F2、T6F4二者的差异不显著,对T6DZ差异显著。734各处理之间细胞色素P450含量的差异不显著,只是734F2、734F4的P450含量在24-48h时期突然增高,而后开始下降,突然增高可能是对氟化物的应激作用。734F2、734F4与T6F2的P450含量差异显著。T6在氟化物作用下细胞色素P450含量增加,而734变化不明显,可以推断细胞色素P450对家蚕耐氟性可能存在协同作用。3.耐氟品系T6和敏感品系734五龄血液的蛋白SDS-PAGE电泳在五龄不同时期对T6和734两个品系经不同添氟处理后的血液蛋白进行SDS-PAGE电泳,发现T6F2、T6F4在添氟后168h出现差异条带,在标准蛋白分子量30KD左右,初步推断家蚕血液中30KD的某种或某些蛋白与家蚕耐氟性相关。对于此蛋白有待进一步研究。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
第一章 文献综述  11-25
  1.1 氟中毒的研究概况  11-15
    1.1.1 氟的性质及自然分布  11-12
    1.1.2 氟化物的免疫毒性  12-14
    1.1.3 氟的遗传毒性  14
    1.1.4 氟中毒及防治研究进展  14-15
  1.2 家蚕氟中毒的研究概况  15-18
    1.2.1 氟对桑叶的污染  15
    1.2.2 氟化物对蚕的危害  15-17
    1.2.3 家蚕氟中毒的生理特征  17
    1.2.4 家蚕氟中毒的机理  17-18
    1.2.5 家蚕氟中毒及防治研究进展  18
  1.3 细胞色素P450的概述  18-22
    1.3.1 细胞色素P450的发现及研究简史  18-19
    1.3.2 细胞色素P450的起源及类型  19-20
    1.3.3 细胞色素P450的分布及结构  20-21
    1.3.4 细胞色素P450的命名  21
    1.3.6 细胞色素P450的反应机制  21-22
  1.4 昆虫细胞色素P450  22-25
    1.4.1 昆虫细胞色素P450的多样性  22
    1.4.2 昆虫细胞色素P450功能  22-23
    1.4.3 昆虫细胞色素P45O与抗药性  23-24
    1.4.4 家蚕细胞色素P450研究进展  24-25
第二章 引言  25-27
  2.1 研究背景及研究意义  25
  2.2 本研究主要内容  25-26
  2.3 技术路线  26-27
第三章 氟化物对家蚕健康的影响  27-39
  3.1 实验材料和试剂  27
  3.2 方法  27-28
    3.2.1 家蚕饲养和添氟处理  27
    3.2.2 氟敏指数调查方法  27
    3.2.3 家蚕氟中毒后体色的观察  27
    3.2.4 家蚕生长变化初步调查  27-28
    3.2.5 家蚕体重增长指数的方差分析  28
  3.3 结果与分析  28-37
    3.3.1 氟敏指数调查分析结果  28-30
    3.3.2 家蚕氟中毒后体色的变化  30-31
    3.3.3 家蚕生长变化  31-37
  3.4 讨论  37-39
第四章 氟化物对家蚕细胞色素P450含量影响  39-55
  4.1 实验材料和试剂  39-41
    4.1.1 家蚕品种  39
    4.1.2 主要试剂  39-40
    4.1.3 主要仪器  40-41
  4.2 方法与步骤  41-43
    4.2.1 实验材料  41
    4.2.2 酶液制备  41
    4.2.3 蛋白质含量测定  41-42
    4.2.4 P450及b5含量测定  42
    4.2.5 家蚕血液样品的处理  42
    4.2.6 变性聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)胶的制备  42-43
    4.2.7 硝酸银染色的步骤  43
    4.2.8 实验数据处理  43
  4.3 结果与分析  43-51
    4.3.1 蛋白质标准曲线  43
    4.3.2 细胞色素P450与b5的含量  43-49
    4.3.3 细胞色素P450和b5的相关性  49-51
  4.4 讨论  51-55
第五章 总结  55-57
参考文献  57-65
硕士在读期间发表的论文  65-67
致谢  67

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 蚕桑 > 蚕的病虫害及其防治
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