学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

酶膜反应器水解酪蛋白连续制备ACE抑制肽的研究

作　者: 李恒星
导　师: 冯凤琴
学　校: 浙江大学
专　业: 食品科学
关键词: 酪蛋白酶膜反应器 ACE抑制肽连续制备
分类号: TQ464.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 70次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本论文研究了以牛乳酪蛋白为原料,通过将酶解反应与膜分离相耦合高效、经济、连续地水解酪蛋白制取血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽的技术。本文首先进行了水解用蛋白酶的筛选及酶解条件的优化。以酶解液的ACE抑制率、蛋白质得率为指标,通过单酶和双酶复合水解的相互综合比较,确定了以中性蛋白酶作为本试验的水解用酶,并采用正交试验进行酶解条件的优化,得到酶解反应的最佳条件为:水解温度为40℃,pH值为7.0,酶用量为2000 U/g,底物浓度为8%（w/v）,酶解时间为2h。继而本文研究了将酶解与膜分离耦合连续制备 ACE抑制肽的方法。通过综合考察超滤膜包对原料蛋白质的截留、对酶的截留、膜通量以及膜包滤出液的ACE抑制活性,确定了以截留分子量（MWCO）5k的再生纤维素膜包作为试验用的膜包,并通过优化得到了超滤条件为操作压力0.1MPa,底物浓度8%（w/v）;在此基础上采用静态间歇式反应、半连续反应和连续反应3种不同的模式进行ACE抑制肽的制备,结果表明静态反应的得率、单位时间产量和单位活力酶对应的产量远小于半连续和连续反应,其中连续反应的得率达到43.4%,单位时间产量为6284 mg/h,单位活力酶对应的产量为0.23 mg/U,产物的ACE抑制率达到了81.6%（1mg/mL）,整个系统能持续稳定反应8h以上;所得的ACE抑制肽产物经肠道蛋白酶消化后,ACE抑制率升高,测得其IC₅₀值为0.189 mg/mL,是同等条件下测得的卡托普利的IC₅₀值（0.00035 mg/mL）的540倍。

全文目录

致谢  5-6
摘要  6-7
ABSTRACT  7-12
第一章引言  12-30
  1 前言  12-13
    1.1 血管紧张素转化酶与高血压  12-13
    1.2 ACE对血压的调节机理  13
  2 ACE抑制肽  13-22
    2.1 ACE抑制肽的分类  14-15
    2.2 食品蛋白质来源的ACE抑制肽  15-20
      2.2.1 乳蛋白来源的ACE抑制肽  16-19
      2.2.2 其他食品来源的ACE抑制肽  19-20
    2.3 ACE抑制肽的评价方法  20-22
      2.3.1 动物试验(体内检测)  20
      2.3.2 体外检测  20-22
  3 ACE抑制肽的制备及分离纯化  22-28
    3.1 ACE抑制肽的制备方法  22-23
    3.2 ACE抑制肽的分离和纯化  23-26
      3.2.1 超滤分离  24-25
      3.2.2 层析分离  25-26
    3.3 用酶膜反应器分离制备ACE抑制肽  26-28
      3.3.1 酶膜反应器的优点  27
      3.3.2 酶膜反应器在多肽制备中的应用  27-28
  4 研究内容简介  28-30
    4.1 酶的选择及酶解条件的优化  28-29
    4.2 ACE抑制肽的连续制备  29-30
第二章酶的选择及酶解条件的优化  30-51
  1 引言  30
  2 材料，试剂和设备  30-31
    2.1 材料和试剂  30-31
    2.2 仪器设备  31
  3 试验方法  31-39
    3.1 分析检测方法  31-37
      3.1.1 蛋白酶活力的测定(福林酚法)  31-34
      3.1.2 蛋白质含量的测定—半微量凯氏定氮  34
      3.1.3 蛋白质回收率的测定  34-35
      3.1.4 水解度的测定  35-36
      3.1.5 ACE抑制活性的检测方法(HPLC法)  36-37
    3.2 试验步骤  37-39
      3.2.1 水解用酶的筛选  37-38
      3.2.2 酶解条件的优化  38
      3.2.3 双酶水解  38-39
  4 结果与讨论  39-50
    4.1 蛋白酶活力的测定  39
    4.2 水解用酶的筛选  39-45
      4.2.1 各种蛋白酶酶解液ACE抑制率随时间的变化  39-42
      4.2.2 各种蛋白酶酶解液的水解度随时间的变化  42-43
      4.2.3 得率随时间的变化  43-44
      4.2.4 水解用酶及水解时间的确定  44-45
    4.3 酶解条件的优化  45-50
      4.3.1 正交试验  45-48
      4.3.2 双酶水解  48-50
  5 本章小结  50-51
第三章 ACE抑制肽的连续制备  51-82
  1 引言  51-52
  2 材料，试剂和设备  52-53
    2.1 材料和试剂  52
    2.2 仪器设备  52-53
  3 试验方法  53-58
    3.1 分析检测方法  53-56
      3.1.1 蛋白酶活力的测定  53
      3.1.2 蛋白质含量的测定  53
      3.1.3 膜通量的测定  53-54
      3.1.4 ACE抑制活性的检测方法  54
      3.1.5 ACE抑制肽半抑制浓度(IC_(50))的计算  54
      3.1.6 ACE抑制肽的稳定性实验  54
      3.1.7 CPPs含量测定方法  54-55
      3.1.8 肽的分子量分布的测定  55-56
    3.2 试验步骤  56-58
      3.2.1 超滤膜包的选择  56-57
      3.2.2 超滤条件的优化  57
      3.2.3 水解与分离进程曲线的绘制  57
      3.2.4 半连续反应  57-58
      3.2.5 连续反应  58
      3.2.6 ACE抑制肽的进一步分离及稳定性试验  58
  4 结果与讨论  58-80
    4.1 超滤膜包的选择  58-62
      4.1.1 不同膜包对蛋白质的截留和透过情况  59-60
      4.1.2 不同膜包对酶的截留和透过情况  60-61
      4.1.3 测量不同膜包的膜通量  61
      4.1.4 比较不同膜包滤出液的ACE抑制率  61-62
      4.1.5 超滤膜包的确定  62
    4.2 超滤条件的优化  62-64
      4.2.1 操作压力对酶活力及膜通量的影响  62-63
      4.2.2 料液浓度对膜通量及得率的影响  63-64
    4.3 水解与分离进程曲线的绘制  64-66
      4.3.1 滤出液中蛋白质浓度随时间的变化情况  64
      4.3.2 膜通量随时间的变化情况  64-65
      4.3.3 酶的活力随时间的变化情况  65-66
    4.4 半连续反应  66-69
      4.4.1 滤出液蛋白质浓度及体积随时间的变化  66-68
      4.4.2 原始反应液中蛋白质的浓度变化情况  68-69
    4.5 连续反应  69-71
      4.5.1 滤出液的蛋白质浓度及膜通量随时间的变化  69-71
      4.5.2 原始反应液蛋白质浓度的变化情况  71
    4.6 静态、半连续及连续反应的比较  71-72
    4.7 ACE抑制肽的进一步分离及稳定性试验  72-74
      4.7.1 ACE抑制肽的进一步分离  72-73
      4.7.2 ACE抑制肽的稳定性试验  73-74
    4.8 超滤各部分分子量的分布  74-78
      4.8.1 分子量小于5k部分的分子量分布  75
      4.8.2 分子量小于1k部分的分子量分布  75-76
      4.8.3 分子量大于1k小于5k部分的分子量分布  76-78
    4.9 ACE抑制肽与卡托普利的比较  78-80
  5 本章小结  80-82
第四章结论与展望  82-86
参考文献  86-91
作者简历  91

酶膜反应器水解酪蛋白连续制备ACE抑制肽的研究

内容摘要

全文目录

相似论文