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rhIL-24质粒的构建及rhDCN联合rhIL-24对人外周血单个细胞影响的体外研究

作　者: 常江
导　师: 王桂琴
学　校: 山西医科大学
专　业: 免疫学
关键词: DCN IL-24 PBMC MTT IFN-γ PD-1
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：探讨核心蛋白聚糖(DCN)基因联合白介素-24(IL-24)基因在体外对PBMC功能的影响。方法：1.构建重组质粒pcDNA3.1(+)-DCN和pcDNA3.1(+)-IL-24。经双酶切、测序鉴定基因序列,将重组质粒转入大肠杆菌DH-5α中,大量提取pcDNA3.1(+)-DCN和pcDNA3.1(+)-IL-24重组质粒；2.利用脂质体2000将重组质粒pcDNA3.1(+)-DCN和pcDNA3.1(+)-IL-24转入PBMC,鉴定转染效率,并通过RT-PCR检测细胞内DCN和IL-24的mRNA表达；3.测定重组质粒对PBMC的影响：MTT法检测转染后PBMC的增殖、ELISA测定转染细胞IFN-r分泌水平、流式细胞技术(FCM)检测PBMC表面PD-1的表达。结果：1.构建的质粒经EcoRⅠ.NotⅠ双酶切及PCR鉴定后,所得的基因片段与预期的基因片段大小相符；经DNA测序证实：序列与GenBank中IL-24的序列一致；2.通过脂质体2000将重组质转入PBMC后,荧光显微镜下可见细胞内绿色荧光的表达；RT-PCR检测到细胞内有DCN和IL-24的mRNA表达；3.MTT法检测细胞增殖：转染后96h、120h、144h,DCN与IL-24联合组的细胞增殖率明显高于DCN组,IL-24组,空质粒组,空白对照组,脂质体组；ELISA显示：DCN与IL-24联合组分泌IFN-γ的量显著高于其他组,有统计学差异(P<0.05)；流式细胞技术(FCM)显示：PD-1受体的表达水平,联合组高于其它组。结论：成功构建了pcDNA3.1(+)-IL-24重组质粒；利用脂质体转染法将DCN和IL-24重组质粒转入PBMC,二者能显著促进PBMC的增殖,并增加IFN-γ的分泌及其表面PD-1受体的表达。提示DCN和IL-24联合对PBMC活性能显示更强的促进作用。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
缩略语表  7-8
正文  8-35
  前言  8-9
  材料与方法  9-20
  结果  20-29
  讨论  29-32
  参考文献  32-34
  小结  34-35
综述  35-42
  正文  35-39
  参考文献  39-42
个人简介  42-43
致谢  43

rhIL-24质粒的构建及rhDCN联合rhIL-24对人外周血单个细胞影响的体外研究

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