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两型星形胶质细胞损伤后胰甘油三酯脂酶的表达研究

作　者: 赵俊利
导　师: 夏春林
学　校: 苏州大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 星形胶质细胞胰甘油三酯脂酶细胞谱系细胞损伤神经再生与修复壳聚糖
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

星形胶质细胞是中枢神经系统(central nervous system, CNS)中数目最多,分布最广的神经胶质细胞。根据星形胶质细胞发生分化的“双谱系学说”,可以分为1型星形胶质细胞(type 1 astrocyte, T1A)和2型星形胶质细胞(type 2 astrocyte, T2A)两型,T1A表达调控缝隙连接的基因-连接蛋白CX43、参与血脑屏障的形成、表达主要组织相容复合物Ⅱ(MHCⅡ)和参与神经免疫等；T2A可合成硫酸软骨素、聚集神经递质GABA、参与细胞外神经递质的调节,并围绕在郎飞结周围,参与维持郎飞结及中枢神经系统髓鞘的形成和功能。星形胶质细胞基因表达谱分析显示,胰甘油三酯脂酶(pancreatic triglyceride lipase, PTL)在T1A和T2A中表达差异显著,提示PTL可能在两型星形胶质细胞中所起作用的机制不同。因此,探讨PTL在中枢神经系统损伤后再生和修复过程中所起的作用,有助于为中枢神经系统损伤的治疗新途径提供新的思路和方法。目的建立两型星形胶质细胞体外损伤模型,检测细胞损伤后胰甘油三酯脂酶的表达变化,探究胰甘油三酯脂酶在中枢神经系统损伤后再生与修复过程中的作用。方法利用两型星形胶质细胞生长时间及细胞粘附特性的差异,采用震荡法和差速贴壁法,分离纯化出T1A和T2A。免疫荧光双标对两性星形胶质细胞进行鉴定并检测PTL在两型星形胶质细胞中的表达情况。划痕法建立两型星形胶质细胞的体外损伤模型,分别收集两型星形胶质细胞损伤后6h、12h、24h、48h以及正常无损伤组的细胞,以Real-time PCR和Western blot分别检测不同时间点T1A和T2A中PTLmRNA和蛋白的表达变化。于星形胶质细胞损伤后PTL表达量最高的时间点,分别向两型星形胶质细胞中加入不同浓度的壳聚糖,处理24h后,收集细胞,Western blot检测星形胶质细胞中PTL的表达变化。结果采用振荡培养与差速贴壁法成功分离出了1型星形胶质细胞和2型星形胶质细胞；免疫荧光双标结果显示,PTL在2型星形胶质细胞中广泛分布,细胞核,细胞浆以及突起中均可见有较强的阳性信号,而1型星型胶质细胞中仅细胞核中有微弱的表达；对T1A和T2A机械性损伤后,Real-time PCR和Western blot结果显示,PTLmRNA和蛋白的表达均有所增高,并于24h达到峰值,与正常组相比差异具有显着性(P<0.01),之后表达量下降；且PTL在T2A中的表达水平,远高于在T1A中的表达水平。不同浓度壳聚糖处理损伤24h的星形胶质细胞后,Western blot结果显示,低浓度的壳聚糖使损伤后的星形胶质细胞中PTL的表达水平增高,但随着壳聚糖浓度的提高,PTL表达量下降。结论(1)胰甘油三酯脂酶在星形胶质细胞损伤后表达水平增高,提示：胰甘油三酯脂酶可能与CNS损伤后再生和修复过程密切相关；(2)胰甘油三酯脂酶在正常及损伤的2型星形胶质细胞中表达水平均显著高于1型星形胶质细胞,提示：2型星形胶质细胞在CNS脂质代谢及损伤后再生过程中的髓鞘形成方面起重要作用；(3)低浓度的壳聚糖处理损伤后的星形胶质细胞,使其胰甘油三酯脂酶表达水平增高,提示：壳聚糖对CNS损伤后修复与再生过程中的脂质代谢方面有调节作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-13
  参考文献  11-13
第一部分两型星形胶质细胞损伤后胰甘油三酯脂酶的表达  13-35
  材料和方法  13-22
  结果  22-31
  讨论  31-33
  参考文献  33-35
第二部分壳聚糖对损伤后星形胶质细胞胰甘油三酯脂酶表达影响  35-41
  材料和方法  35-36
  结果  36-38
  讨论  38-39
  参考文献  39-41
结论  41-42
综述  42-54
缩略词表  54-55
研究生期间发表和待发表的文章  55-56
致谢  56

两型星形胶质细胞损伤后胰甘油三酯脂酶的表达研究

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