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肿瘤细胞来源微颗粒包裹化疗药物对肿瘤的治疗

作　者: 许平伟
导　师: 黄波
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 微颗粒肿瘤生物治疗靶向治疗载体
分类号: R730.54
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：微颗粒是由细胞受到生理或者人为刺激是产生的一种细胞膜碎片，直径在0.1-1μm之间。当肿瘤细胞与化疗药物共培养时，肿瘤细胞产生含有化疗药物的微颗粒。微颗粒作为载体，将化疗药物传递到肿瘤部位，借此探讨肿瘤治疗的新方法。方法：1、体外实验1×10~7H22细胞紫外照射40min，再用不同浓度的MTX（10μg/ml,30μg/ml,50μg/ml）处理，将提取出来的MP加入到3×10~5H22细胞中，观察细胞被杀伤的时间和效果；2、肿瘤模型1）皮下瘤模型BALB/c小鼠皮下每只接种H22细胞2×10~5个，待瘤子长到5×5mm3大小时，开始用2mg/ml MTX处理的4×10~7H22细胞所提的微颗粒治疗，尾静脉连续注射9天，每天一次，每天量取肿瘤大小，体重并记录。2）肌肉瘤模型将5×10~4个H22细胞接种到BALB/c雌性小鼠后腿肌肉中，第4天开始对其进行2mg/ml MTX处理提取的MP进行治疗，尾静脉连续注射9天，每天一次，每天称量体重，第14天处死小鼠，将瘤体称重，并取其外周血检测ALT、肌酐含量。3）肝癌腹水模型3×10~5个H22细胞注入BALB/c小鼠腹腔内，接种第5天开始腹腔注射2mg/ml的MTX处理的4×10~7H22细胞来源微颗粒，连续注射10天，每天一次，然后观察生存率。4）卵巢癌模型取8周大小的裸鼠腹腔注射A2780细胞1×10~7个，待细胞在体内生长10天后，分别腹腔注射100μg/ml紫杉醇联合320μg/ml顺铂处理的4×10~7H22细胞提取的MP，320μg/ml顺铂处理的4×10~7H22细胞提取的MP，连续注射7天，第20天再次注射MP治疗，连续治疗7天。第30天处死小鼠取出瘤体，称重，拍照。3、荧光检测将2mg/ml MTX处理4×10~7H22所得的MP进行PKH26染色，然后从荷瘤BALB/c小鼠尾静脉注射，4小时后取肿瘤组织做冰冻切片，荧光显微镜观察肿瘤组织中荧光强度。4、微颗粒计数将1×10~7H22细胞紫外照射40min后分别用10μg/ml，50μg/ml MTX处理。提取MP，并用0.1μm过滤过的PBS重悬，以减少背景或者非特异性物质，流式细胞仪进行计数,0.8μm beads (具有荧光，能通过FL4通道检测)设门、调节电压，已知数量的0.3μm beads（LB30）作为标准，用于计数，每个LB30珠子都在3μm门形成一个圆点。如果收集到10,000个LB30珠子，那么微颗粒数量计算为：10,000×(MPs百分比/LB30百分比）。5、高效液相色谱法检测微颗粒的药物含量用高效液相色谱法检测。将1×10~8个H22细胞经过10,50,100,200,400,800μg/ml MTX处理，所提取的MP用NP-40裂解液分别裂解后，高效液相色谱法检测其药物含量。结果：1、不同浓度的MTX处理H22细胞所提取的MP杀伤细胞的效果不同，随着处理H22细胞时MTX浓度的增加，杀伤效果逐渐明显。2、皮下瘤和肌肉瘤模型经过连续治疗，治疗组的肿瘤积比对照组小，治疗组和对照组的体重、肌酐和转氨酶并无明显差别，腹水模型的治疗组存活率比对照组高，卵巢癌的小鼠治疗组的肿瘤体积比对照组小。3、染色的微颗粒在肿瘤组织中聚集, PKH26染色的MP尾静脉注射4小时后在肿瘤组织发现了较强的荧光。4、10μg/ml MTX处理的1×10~7H22细胞检测到了7×10~5微颗粒，50μg/ml MTX处理的1×10~7H22细胞检测到了1×10~6微颗粒。5、HPLC检测到1×10~8H22细胞提取到的MP含药量约为化疗药物处理细胞时浓度的1%。结论：包裹化疗药物的MP对肿瘤具有治疗作用，未发现不良反应,具有潜在的临床应用价值。

全文目录

目录  4-5
英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-12
前言  12-14
材料与方法  14-23
结果  23-29
讨论  29-31
参考文献  31-33
综述  33-42
  参考文献  38-42
发表论文  42-43
致谢  43

肿瘤细胞来源微颗粒包裹化疗药物对肿瘤的治疗

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