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脂联素和脂联素抗体通过壳聚糖水凝胶对骨关节炎的影响研究

作　者: 王维新
导　师: 邱贵兴
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 脂联素脂联素单抗骨关节炎壳聚糖温度敏感水凝胶
分类号: R684.3
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的骨关节炎(OA)是常见的关节疾病,发病率高和致残率较高,并且缺乏有效控制病情或逆转病情的保守治疗方法。OA的发病机制尚不完全明确,近年来不少研究发现,力学负荷超载导致机械性的软骨破坏只能部分解释肥胖与OA的联系,肥胖时异常分泌的脂肪因子可能具有重要的病理生理作用。通过对OA发病机制的研究,可以发现OA发生发展中的重要作用因子,探索控制病情的治疗方案,具有重要的临床意义。本研究包括两个部分：1、研究脂肪因子脂联素和脂联素单克隆抗体对软骨细胞的影响。2、配制壳聚糖-甘油磷酸二钠温敏水凝胶,并评估其细胞相容性。方法1、培养软骨细胞,在镜下观察细胞形态,并用脂联素和脂联素单抗刺激细胞,通过荧光定量PCR检测IL-6和胶原蛋白表达量。2、配制壳聚糖-甘油磷酸二钠温敏水凝胶,研究凝胶的温敏特性,并通过CCK-8法评估其细胞相容性。结果1、1μg/ml脂联素可促使软骨细胞表达大量的IL-6,较对照组表达量高110倍(P<0.001),通过换液去除培养基中的脂联素后,IL-6的表达量又明显下降(P<0.001),提示脂联素可刺激软骨细胞产生IL-6。1μg/ml脂联素单抗刺激软骨后IL-6的表达量仅稍高于对照组。质量分数相等的脂联素和脂联素单抗同时刺激软骨细胞,IL-6的表达量与脂联素单独刺激软骨细胞时的表达量无明显差异。提示脂联素单抗没有阻断脂联素与其受体的作用,或者抗体的量相对于脂联素量过小。Ⅱ型胶原酶的表达量显示,脂联素减少了软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的表达,而脂联素抗体可以增加Ⅱ型胶原蛋白的表达量。2、通过混合不同比例的壳聚糖和甘油磷酸,得到了可以在生理温度下凝固的水凝胶。试验发现,CS含量固定时,胶凝温度随GP的含量增高而降低,胶凝时间随GP的含量增高而缩短。通过CCK-8法评估CS/GP凝胶的相容性,发现在不同量凝胶的刺激下,软骨细胞均可缓慢的增长,而细胞活力在缓慢增长后出现了缓慢下降的趋势。结论1、脂联素可致软骨细胞IL-6表达量增高,并且降低了Ⅱ型胶原的表达,在OA的发生发展过程中起到一定的破坏作用。脂联素单抗可能促进软骨细胞表达Ⅱ型胶原,对促进软骨基质的生成。2、CS/GP水凝胶可在生理温度下形成温度敏感水凝胶,与软骨细胞共培养时,细胞表现出了一定的活力和增殖力,提示CS/GP可进一步应用于关节腔内注射载药的研究。

全文目录

中文摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
前言  7-16
  1. 骨关节炎  7-8
  2. 肥胖、脂联素和OA  8-9
  3. 壳聚糖温敏水凝胶  9-10
  4. 实时荧光定量PCR  10-13
  5. CCK-8细胞增殖与活性检测  13-14
  6. 实验内容  14
  参考文献  14-16
第一部分配制壳聚糖/甘油磷酸水凝胶  16-26
  1. 材料  16-17
  2. 试验方法  17-18
  3. 结果及讨论  18-25
  4. 总结  25
  参考文献  25-26
第二部分脂联素和脂联素单抗刺激软骨细胞  26-41
  1. 材料  26-27
  2. 试验方法  27-31
  3. 结果及讨论  31-39
  4. 总结  39-40
  参考文献  40-41
综述  41-58
  参考文献  51-58
致谢  58-59

脂联素和脂联素抗体通过壳聚糖水凝胶对骨关节炎的影响研究

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