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观察人乳腺癌裸鼠移植瘤内淋巴管的形态及特点,进而探讨移植瘤内是否存在淋巴管新生。电镜下观察人乳腺癌肿瘤内部及周边淋巴管的形态及特征,探讨乳腺癌组织内是否存在新生的淋巴管及淋巴管的分布特点,以D2-40,CD31,CD34分别标记乳腺癌中淋巴管和血管,探讨D2-40,CD31,CD34对乳腺癌中微淋巴管的检测价值及对淋巴管和血管的鉴别价值；研究新生淋巴管的密度及分布特点,探讨癌周微淋巴管密度与患者年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、分级及分子分型的关系。从而为研究乳腺癌的淋巴转移及临床治疗、选择辅助治疗方案、判断预后提供有力的依据。建立人乳腺癌阿霉素耐药细胞移植瘤模型共18例,以D2-40标记淋巴管,光镜下观察移植瘤内是否存在新生淋巴管及其分布、形态特点。应用透射电镜观察微淋巴管形态特征。收集2007年1月-2010年6月在空军总医院行手术治疗并进行腋窝淋巴结清扫的乳腺癌病例,选择临床资料完整的病例,删除术前进行新辅助化疗及放疗的病例共124例。所选病例均经病理证实为浸润性导管癌,另选取乳腺良性肿瘤20例做为对照。其中30例病例应用透射电镜观察新生淋巴管的形态特征。将所有的病例进行伊红-苏木素染色(Hematoxylin and eosin, HE)及孕激素受体(Progestogen receptor, PR)、雌激素受体(Estrogen receptor, ER)、人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor-2, HER-2)、细胞角蛋白5/6(Cytokeration5/6, CK5/6)、上皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR), D2-40, CD31, CD34,P63免疫组化染色。将免疫组化HER-2为(++)的病例进行荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)检测。根据肿瘤的腺样结构、细胞异型性、核分裂像进行组织学评分及组织学分级；依据免疫组化结果将肿瘤分为四种分子分型。应用SPSS17.0统计软件进行分析,组间率的比较应用多个样本率的χ2检验及多组变量间的方差分析,以0.05为检验水准,P<0.05为差异有统计学意义。经组织病理学证实人乳腺癌裸鼠模型建成后,在光镜下及电镜下观察到裸鼠乳腺癌肿瘤组织周边存在新生的淋巴管,管壁薄,管腔扩张,不规则。124例乳腺浸润性导管癌中癌巢内几乎未见到微淋巴管。乳腺浸润性导管癌癌周组织淋巴管数量增多,形态不规则,管腔薄,部分呈闭塞状态,部分扩张明显,呈条索状或丛状,围绕癌组织成环状分布,位于肿瘤周边D2-40阳性的淋巴管管腔多为开放性,位于肿瘤内部的D2-40阳性淋巴管管腔较小、狭窄、闭塞甚至缺如,部分癌周淋巴管内可见癌栓。CD31, CD34阳性的血管在肿瘤周边及内部均可以检测到,并且分布无明显差异。癌周微淋巴管密度(lymphatic microvessel density LMVD)与年龄无相关性,≤35岁,35-65岁,≥65岁LMVD分别为14.897i2.508,13.753i4.253,11.959i3.3888,χ2=3.7692, P0.1519,差异无统计学意义。随着肿瘤长径增大,LMVD的密度越高,肿瘤最大长径≤2cm,2cm-5cm之间,>5cm的LMVD分别为11.309i4.611,14.494i3.263,15.499i3.939,χ2=6.0046,P=0.0497,差异具有统计学意义。组织学分级越高,LMVD的密度越高,P=0.0000,组织学分级为Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级LMVD分别为11.235i4.700,13.766i3.423,17.466i3.392,差异具有显著统计学意义。淋巴结转移组LMVD高于淋巴结未转移组,LMVD分别为13.111i4.199,14.623i3.763,P=0.0490,差异具有统计学意义。LuminalA型,LuminalB型,Basal-like型,HER-2型每组分型中LMVD的均数分别为13.070,13.807,14.850,13.524。预后最差的Basal-like乳腺癌的LMVD的均数最高,其次为预后较差的HER-2过表达型,而预后最好的LuminalA型LMVD的均数最低为13.070,但χ2=4.0394,P=0.2573,各组分型中LMVD的均数无显著差异。经研究证实,乳腺癌组织中存在新生的淋巴管并且主要分布于肿瘤的周边组织。新生的淋巴管的密度与肿瘤的大小及分级密切相关,对乳腺癌周边组织中的淋巴管进行计数,可以对临床判断预后,提高患者生存率、以及为研究淋巴道转移提供依据。
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