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原发性干燥综合征唇腺异位生发中心形成机制研究

作　者: 林东方
导　师: 赵岩
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 原发性干燥综合症异位生发中心 CD24~+B淋巴细胞 Th17细胞趋化因子临床资料
分类号: R593.2
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

[背景]在原发性干燥综合征(primary Sjogren’s syndrome, pSS)中约1/5患者的唇腺病理出现异位生发中心(Ectopic germinal centers, EGCs),其病理作用目前尚不完全清楚,有待深入研究。对EGCs的研究有助于了解SS患者受累靶器官炎症细胞的招募和脏器损伤过程。本研究通过唇腺病理免疫组化(Immunohistochemistry, IHC) CD21染色、HE染色、流式细胞计数(Flow cytometry, FC)及酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)比较pS患者唇腺病理有无异位生发中心形成者唇腺中淋巴细胞的浸润、B淋巴细胞自我活化、T淋巴细胞调节炎症程度的差异以及两者在外周血相应淋巴细胞的分布、迁移及临床病情的差异。[目的]研究原发性干燥综合征唇腺异位生发中心形成的发生机制。[方法]研究通过免疫组化染色CD21标记异位生发中心周围树突状细胞网络结构观察pSS患者唇腺EGCs形成的比例。把受试者按唇腺病理免疫组化(IHC) CD21染色及HE染色结果分成4组,0级组(GO)为正常唇腺,1级组(G1)唇腺病理中可见淋巴细胞分散浸润、2级组(G2)唇腺病理中可见导管旁淋巴细胞浸润,3级组(G3)唇腺病理中可见异位生发中心形成。通过唇腺病理免疫组化检测未成熟B淋巴细胞标记CD24、T调节细胞Th17标记IL17,相关趋化因子CXCL13,用光密度法及评分法对照各组患者的淋巴细胞分化、调节及趋化情况,并用细胞流式计数法对照各组患者外周血CD24+CD19+B淋巴细胞、TH17细胞及CXCR4、CXCR5细胞外周血比例,ELISA法对照各组患者的趋化因子CXCL13、CXCL12浓度,临床统计各组患者的系统受累指标的差异。[结果]统计pSS患者唇腺病理38例CD21染色,8例患者(21.1%)有异位生发中心形成。1.GO(正常对照)唇腺病理1例CD24、IL17、CXCL13仅在唇腺导管上皮细胞染色。G1、G2组患者的CD24、IL17、CXCL13除出现在唇腺导管上皮细胞,还出现在淋巴浸润灶,G3组患者的各指标分布有分区现象,CD24主要分布于EGCs内部及边缘区、IL17主要分布在淋巴浸润灶外周,CXCL13主要在滤泡区周围表达。IL17和CD24高度正相关。2.G3组患者唇腺病理中,有异位生发中心形成的淋巴浸润灶CD24.IL17.CXCL13与无异位生发中心形成的淋巴浸润灶平均光密度值均无显著差异。3.唇腺病理不同组的pSS患者CD24、IL17、CXCL13平均样品光密度及IL17、CXCL13评分法比较,CD24:G3>G2>G1, IL17:G3>G2>G1, CXCL13:G3>G1>G2。G3组患者上述三项指标明显高于其他组,62.5%G3组患者高于这些指标的95%置信区上限。4.与正常对照比pSS患者外周血中Th17细胞及CXCR4日性细胞比例都显著增高,血浆中CXCL13水平显著增高,外周血Th17细胞与血浆中CXCL13水平呈正相关。5.唇腺病理不同组的患者CD24、Th17和CXCL13以及配体(CXCR4、CXCR5)在外周血的表达比较,表达CD24阳性细胞和IL17阳性细胞均为G3组>G2组>G1组,外周血CD19+CD24+B淋巴细胞G3组<G2组<G1组,Th17细胞G2组>G1组>G3组：唇腺病理CXCL13阳性细胞G3组>G1组>G2组而外周血血浆中CXCL13G2组>G1组>G3组,外周血CXCR5阳性细胞G1组>G3组>G2组；外周血血浆中CXCL12G1组>G3组>G2组,CXCR4阳性淋巴细胞G2组>G3组>G1组。6.除G2组患者在SICCA角膜染色评分上比G1组患者明显增高外,其它主要各项指标各组间无明显差异。[结论]1.原发性干燥综合征患者唇腺病理中约21%有异位生发中心形成,且均出现在中重度淋巴细胞浸润的患者中。2.有异位生发中心形成的患者CD24阳性B淋巴细胞从外周血往唇腺迁移的能力较强3.Th17细胞参与了pSS患者唇腺淋巴浸润和异位生发中心形成。4.淋巴细胞趋化因子CXCL13及受体CXCR5参与淋巴细胞向唇腺迁移、浸润以及异位生发中心的形成。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-8
Abstract  8-11
前言  11-13
实验材料  13-18
  一、实验对象  13
  二、主要试剂  13-14
  三、主要仪器  14-15
  四、试剂配制  15-16
  五、软件  16-18
实验方法  18-27
  一、唇腺活检石蜡切片HE染色  18-19
  二、唇腺活检石蜡切片免疫组化两步法染CD21、CD24、IL17及CXCL13  19-21
  三、流式细胞仪测外周血CXCR5~+、CXCR4~+、Th17和CD19~+CD24~+细胞  21-24
  四、ELISA法测外周血CXCL12、CXCL13趋化因子浓度  24-27
统计方法  27-28
实验结果  28-60
  一、患者临床资料  28
  二、HE染色结果分析  28-29
  三、唇腺病理免疫组化结果分析  29-49
  四、外周血流式细胞计数结果分析  49-53
  五、外周血ELISA结果分析  53-54
  六、唇腺病理不同分级的患者外周血和唇腺病理相关指标的比较  54-57
  七、唇腺病理不同分级的患者临床数据比较  57-60
讨论  60-69
参考文献  69-73
感谢信  73-74
综述  74-82
  参考文献  77-82
附录  82

原发性干燥综合征唇腺异位生发中心形成机制研究

内容摘要

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