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咳喘宁对哮喘大鼠肺组织趋化素样因子1表达的影响

作　者: 陈春辉
导　师: 刘克丽
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医儿科学
关键词: 咳喘宁 CKLF1 哮喘大鼠 免疫组化 RT-PCR
分类号: R272
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：通过建立SD (Sprague-Dawley)大鼠哮喘模型,采用免疫组化法和RT-PCR的方法,检测哮喘大鼠肺组织中趋化素样因子1(CKLF1)的表达水平,探讨CKLF1在哮喘发病中的表达变化以及咳喘宁对其的影响。方法：50只清洁级健康雄性SD大鼠,根据随机分配原则,将其按体重编号,采用随机数字表法分为正常组(A组)和造模组；造模组以卵白蛋白(OVA)为过敏原、氢氧化铝为佐剂致敏SD大鼠,并连续2周予OVA雾化吸入激发制备哮喘大鼠模型。大鼠造模成功后,分为模型组(B组)、布地奈德组(C组)和咳喘宁组(D组)。模型组予生理盐水雾化吸入,各治疗组分别给予相应药物雾化吸入,连续用药7天,观察整个实验过程中各组动物的一般情况。末次用药24小时内处死大鼠,采集标本,左肺行支气管肺泡灌洗后细胞计数、分类计数；右肺组织用于观察肺组织病理变化；同时行免疫组化观察肺组织CKLF1蛋白表达,RT-PCR法检测肺组织中CKLF1的基因表达。结果：1.大鼠激发的表现：大鼠激发后表现为易激惹、烦躁、不断搔抓颜面部皮毛等过敏症状,呼吸加快加深,喘息,口鼻轻度发绀,腹部抽动,激发期间活动明显减少、俯伏不动,反复激发后大鼠精神差,反应不灵敏,毛色偏黄无光泽。2.各组大鼠支气管肺泡灌洗液的细胞计数及分类计数：模型组BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数及EOS均升高(P<0.05)；咳喘宁组与模型组比较, BALF中白细胞总数、淋巴细胞数、EOS均降低(P<0.05)；咳喘宁组与布地奈德组比较,BALF中各细胞数无明显差异(P>0.05)。3.各组大鼠肺组织病理变化：正常组无明显炎症改变。模型组呈显著炎性变化。布地奈德组与咳喘宁组均呈轻度炎症变化。4.各组大鼠肺组织CKLF1免疫组化表达：CKLF1在正常组大鼠肺组织呈弱阳性表达；模型组大鼠肺组织内CKLF1的表达明显较正常组增加；布地奈德组和咳喘宁组CKLF1表达明显强于正常组，弱于模型组；布地奈德组与咳喘宁组比较CKLF1表达无明显差异。5.各组大鼠肺组织CKLF1mRNA表达：模型组大鼠肺组织中CKLF1mRNA表达水平明显升高,与正常组比较差异显著(P<0.05)。布地奈德组和咳喘宁组CKLF1mRNA表达水平明显弱于模型组(P<0.05),咳喘宁组CKLF1mRNA表达水平与布地奈德组相近,无显著差异(P>0.05)。结论：咳喘宁能减轻哮喘大鼠肺组织的炎性反应；模型组大鼠肺组织中CKLF1的表达水平明显升高,咳喘宁治疗能降低CKLF1的表达。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-11
英汉縮略词对照表  11-12
引言  12-15
第一部分 实验材料与方法  15-25
  1. 实验材料  15-18
    1.1 实验动物  15
    1.2 实验环境  15
    1.3 实验饲料  15
    1.4 实验药物  15-16
      1.4.1 造模药物  15
      1.4.2 受试药物  15-16
    1.5 试剂  16
    1.6 主要仪器及设备  16-17
    1.7 溶液配制  17-18
    1.8 引物设计与合成  18
  2. 实验方法  18-25
    2.1 实验动物分组  18
    2.2 实验动物造模方法  18-19
    2.3 治疗方法  19
    2.4 观察指标及检测方法  19-24
      2.4.1 支气管肺泡灌洗液  19-20
      2.4.2 肺组织病理学观察  20-21
      2.4.3 免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织中CKLF1的表达  21
      2.4.4 RT-PCR法检测各组大鼠肺组织CKLF1mRNA表达  21-24
    2.5 统计方法  24-25
第二部分 实验结果  25-28
  1. 大鼠激发的表现  25
  2. 支气管肺泡灌洗液细胞计数和分类计数  25
  3. HE染色观察各组大鼠肺组织病理形态学特点  25-26
  4. 各组大鼠肺组织CKLF1免疫组化  26
  5. 各组大鼠肺组织中CKLF1mRNA的表达变化  26-28
第三部分 讨论  28-38
  1. 实验动物的选择  28-29
  2. 动物模型的评价方法  29
  3. 实验指标的选择：趋化素样因子1(CKLF1)与哮喘  29-31
  4. 阳性对照药物的选择  31-32
  5. 咳喘宁的立法依据、组方分析及现代药理学研究分析  32-36
    5.1 立法依据  32-33
    5.2 组方分析  33-34
    5.3 现代药理学研究分析  34-36
  6. 本实验有关问题的探讨  36-38
结论  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-45
附录  45-63
  附录一 综述  45-60
    参考文献  56-60
  附录二 附图  60-63
  附录三 研究生期间发表的论文  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医儿科
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