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地方鸡对马立克氏病的抗性研究及FSHβ基因的遗传变异

作　者: 张娇
导　师: 王慧
学　校: 山东农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 鸡 FSHβ基因 TNFSF13B基因 NRAMP1基因抗马立克氏病
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

在畜牧业的发展中，抗病育种占有相当大的比重。芦花鸡、寿光鸡、百日鸡等优良地方鸡种质资源是育种和生产的物质基础。通过分子遗传标记检测影响产蛋性能和抗病性的重要候选基因，可以从遗传上提高或改良鸡的经济性状，并为鸡的抗病育种研究提供重要数据。FSHβ是影响家禽繁殖性状的重要候选基因，其对开产日龄、产蛋量和蛋品质性状有重要影响。天然抗性相关巨噬细胞蛋白1（NRAMP1）基因和肿瘤坏死因子SF13B（TNFSF13B）基因是影响家禽抗病力的候选基因。本研究主要采用PCR-SSCP技术对寿光鸡FSHβ基因变异及其与繁殖性状的相关性进行了研究；通过人工攻毒实验，对比分析了4个品种鸡对马立克氏病的抗病性；利用荧光定量PCR技术，检测了芦花鸡、寿光鸡、百日鸡和SPF鸡的NRAMP1和TNFSF13B基因的表达量差异及其与抗马立克病的相关性。主要研究结果如下：一、对寿光鸡的FSHβ基因序列的外显子3区域进行了直接测序，发现了1个单核苷酸突变位点A2540C。采用PCR-SSCP方法，检测了寿光鸡外显子3区域的多态性，结果检测到AA、BB和AB三种基因型。统计分析结果表明：AA型鸡的开产日龄最早，平均为144.30天，AB型鸡的居中，为147.27天，BB型鸡的开产日龄最晚，平均为149.09天，但三种不同基因型鸡的开产日龄之间的差异不显著（p＞0.05）；BB型鸡的43周产蛋量（NE-43W）最多，平均为113.39枚，AB型的居中，平均为121.31枚，AA型的最少，平均为104.36枚，但FSHβ基因的不同基因型对于43周产蛋量（NE-43W）的影响未达到显著水平（p＞0.05）；AA型鸡的畸形蛋数（ENE）最少，平均为0.18枚，BB型的居中，平均为0.23枚，AB型的最多，平均为0.45枚，但FSHβ基因的不同基因型对于畸形蛋数的影响也未达到显著水平（p＞0.05）。二、以SPF鸡为对照，研究了百日鸡、芦花鸡、寿光鸡对马立克氏病的抗病性，4个鸡群同时进行了马立克氏病毒的人工攻毒试验，并检测了MDV感染后四种鸡群免疫相关组织中NRAMP1基因的mRNA表达量的变化。研究结果显示：在L1、L7和S1中，不同鸡种的NRAMP1基因的表达量差异不显著（p＞0.05）；但在S7中，芦花鸡NRAMP1基因的表达量显著高于SPF鸡和寿光鸡（p＜0.05）。研究结果表明：SPF鸡对MDV的易感性最高；芦花鸡对MDV的抗病性最强。三、以SPF鸡为对照，研究了4个鸡群同时攻毒后其免疫相关组织中TNFSF13B基因表达量的变化。结果显示：在S1、S7和L1中，不同鸡种的TNFSF13B基因的表达量差异不显著（p＞0.05）；但在L7中，百日鸡TNFSF13B基因的表达量显著高于SPF鸡、寿光鸡和芦花鸡（p＜0.05）。百日鸡在该组中的TNFSF13B基因的mRNA表达量最高，SPF鸡的表达量最低。

全文目录

符号说明  5-8
中文摘要  8-10
Abstract  10-12
1 前言  12-22
  1.1 山东省优良地方鸡品种及 SPF 鸡  12-14
    1.1.1 汶上芦花鸡  13
    1.1.2 济宁百日鸡  13
    1.1.3 寿光鸡  13-14
    1.1.4 SPF 鸡  14
  1.2 促卵泡激素β亚基（FSHβ）基因的相关研究  14-16
    1.2.1 FSH 基因结构及对畜禽繁殖性状的影响  14-15
    1.2.2 FSHβ基因多态性研究进展  15-16
  1.3 PCR-SSCP 技术及其在鸡遗传育种中的应用  16-17
  1.4 鸡马立克氏病及马立克氏病毒概述  17-19
    1.4.1 鸡马立克氏病及其危害  17-18
    1.4.2 鸡马立克氏病毒感染及其增殖  18-19
  1.5 NRAMP1 基因与抗病性  19-21
  1.6 TNFSF13B 基因与抗病性  21-22
  1.7 本研究的目的及意义  22
2 材料与方法  22-31
  2.1 试验材料  22-25
    2.1.1 样品采集  22-23
    2.1.2 主要仪器  23
    2.1.3 主要试剂及来源  23-24
    2.1.4 常用试剂及其配制  24-25
  2.2 试验方法  25-31
    2.2.1 FSHβ基因的 SNP 分析及其与产蛋性状的相关性研究  25-29
    2.2.2 马立克氏病毒攻毒试验  29-31
3 结果与分析  31-39
  3.1 FSHβ基因突变与繁殖性状的相关性分析  31-33
    3.1.1 FSHβ基因的 SNP 分析  31-32
    3.1.2 FSHβ基因突变位点的不同基因型与鸡早期产蛋性状的相关性分析  32-33
    3.1.3 FSHβ位点不同基因型个体间产蛋性状的最小二乘均值分析  33
  3.2 地方鸡抗马立克氏病的对比试验  33-39
    3.2.1 目的基因的 PCR 扩增  33-34
    3.2.2 荧光定量 PCR 检测结果  34-37
    3.2.3 NRAMP1 基因在肝脾组织中 mRNA 的表达结果  37-38
    3.2.4 TNFSF13B 基因在肝脾组织中 mRNA 的表达结果  38-39
4 讨论  39-44
  4.1 FSHβ基因的 SNP 检测及其与鸡早期产蛋性状的相关性分析  39-41
    4.1.1 FSHβ基因的 SNP 检测及分析  39-40
    4.1.2 FSHβ基因对鸡早期产蛋性状的影响  40-41
  4.2 关于马立克氏病毒攻毒的对比试验  41-44
    4.2.1 NRAMP1 基因在肝脾组织中 mRNA 表达分析  41-42
    4.2.2 TNFSF13B 基因在肝脾组织中 mRNA 表达分析  42-44
5 结论  44-46
  5.1 FSHβ基因的遗传变异与鸡早期产蛋性状的相关性研究  44
  5.2 地方鸡抗马立克氏病的对比试验  44-46
参考文献  46-54
致谢  54-55
攻读学位期间发表论文情况  55

地方鸡对马立克氏病的抗性研究及FSHβ基因的遗传变异

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