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水稻开花相关基因CDK系列基因的克隆

作　者: 李虎
导　师: 关和新
学　校: 广西大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: CDK基因克隆开花基因水稻
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 21次
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内容摘要

随着水稻基因组测序的逐渐完成,基因库的不断完善,水稻也成为了研究单子叶植物和禾本科的模式生物。近年来,许多与抗旱性,花期,育性等农艺性状相关的重要基因被成功克隆。水稻的花期,也称抽穗期,是营养生长向生殖生长过渡的重要阶段。所以对调控水稻开花相关基因的克隆,对研究水稻花期有着深远的意义,有助于完善整个调控开花基因的体系,同时,对育种工作也有着遗传学的指导作用。本文通过过量表达技术(OverExpression)和RNA干扰技术(RNAi)对水稻开花相关基因CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5进行克隆。首先,用RT-PCR技术扩增出cDNA基因序列,然后设计OE引物和RNAi引物以DNA为模板运用PCR技术分别将CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5基因的全长片段和干扰片段扩增出来,通过亚克隆技术将OE片段连接到构建好的pCAMBIA1300-NOS-35S表达载体中,将干扰片段连接到pCAMBIA1300中,最终得到了10个构建完成的克隆载体。构建完成的新的表达载体即可转入农杆菌进行转基因的实验步骤。对上述基因的克隆,为下一步转基因实验提供了材料,也为研究基因的功能和植株的性状打下了基础。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
1 前言  8-16
  1.1 水稻花器官发育的遗传研究进展  8-10
    1.1.1 植物的ABC模型  8-9
    1.1.2 植物花器官发育的MADS-box基因  9
    1.1.3 水稻花器官发育的基因调控  9-10
  1.2 植物功能基因的主要研究方法  10-14
    1.2.1 序列克隆法  10-11
    1.2.2 功能克隆法  11
    1.2.3 RNA干涉技术  11-13
    1.2.4 反义技术  13-14
    1.2.5 基因芯片技术  14
    1.2.6 荧光定量PCR技术  14
    1.2.7 基因功能敲除法  14
  1.3 植物开花基因的最新研究进展  14-15
  1.4 本研究的目的和意义  15-16
2 材料与方法  16-34
  2.1 实验材料  16-18
    2.1.1 植物材料  16
    2.1.2 菌株与质粒  16-17
    2.1.3 主要试剂与仪器  17-18
  2.2 实验方法  18-34
    2.2.1 水稻叶片基因组DNA的提取和鉴定  18-19
    2.2.2 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备(CaCl2法)  19-20
    2.2.3 目的片段的克隆  20-23
    2.2.4 目的DNA的回收  23-24
    2.2.5 目的DNA与克隆载体的连接  24-25
    2.2.6 连接产物的转化  25-26
    2.2.7 表达载体的构建  26-34
3 结果与分析  34-42
  3.1 水稻基因组DNA的提取  34
  3.2 干扰目的片段的PCR扩增  34-35
  3.3 克隆载体的鉴定  35-42
    3.3.1 干扰克隆载体的鉴定  35-40
    3.3.2 超量表达克隆载体的鉴定  40-42
4 结论与讨论  42-47
  4.1 水稻CDK系列基因的克隆  42-43
  4.2 不完全酶切的应用  43-45
  4.3 PCR的常见问题及解决办法  45
  4.4 影响转化效率的因素  45-47
致谢  47-48
参考文献  48-53
附录A  53-54
附录B  54-55

水稻开花相关基因CDK系列基因的克隆

内容摘要

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