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番石榴叶总黄酮的提取、分离纯化及体外生物活性的研究

作　者: 田冰洁
导　师: 吴晓英
学　校: 华南理工大学
专　业: 生物工程
关键词: 番石榴叶总黄酮提取纯化生物活性
分类号: TS201.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本文介绍了番石榴植物在国内外的研究及应用进展，并对其中的黄酮类化合物的研究情况作了详细的叙述。由于番石榴品种和生产地及生长年份的不同，番石榴叶中黄酮类化合物的种类和含量会有所不同。因此，在生产和应用之前，要对不同的番石榴样品进行有效活性成分的研究。本研究主要对江门市江海区南粤金石榴茶制品厂提供的干燥番石榴叶进行总黄酮含量测定方法的比较和总黄酮的提取、纯化及体外生物活性的研究。总黄酮的测定方法一般采用NaNO₂－Al（NO₃）₃比色法、差示分光光度法、AlCl₃比色法和高效液相色谱法。本文以高效液相色谱法为标准对比其他三种方法的优劣，最后选择了操作简单、稳定准确的差示分光光度法作为实验的测定方法。本实验以料液比、提取时间、乙醇浓度和提取次数为考察因素，采用正交实验，确定了番石榴叶中总黄酮提取的最佳工艺参数，即料液比1:20，提取时间1h，乙醇浓度40%，提取次数3次。在优化工艺条件下，乙醇回流法得到的番石榴叶总黄酮得率为3.30%，干膏得率为27.8%。通过AB-8大孔吸附树脂初次纯化番石榴叶总黄酮粗提物，结果表明：纯化前纯度为7.8%，纯化后为13.28%，纯化后黄酮含量比纯化前提高了70.26%。通过DPPH自由基法、硫酸亚铁-水杨酸-双氧水法、还原力及对α-葡萄糖苷酶抑制实验，考察了番石榴叶总黄酮粗提物（样品A）、番石榴叶总黄酮精提物（样品B）的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、还原力及对α-葡萄糖苷酶的抑制。研究发现：样品A和样品B都有一定的抗氧化能力和较强的抑制α-葡萄糖苷酶的能力。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
目录  8-13
第一章绪论  13-27
  1.1 番石榴的地理分布  13
  1.2 番石榴的形态特征  13-14
  1.3 番石榴叶的化学成分  14-18
    1.3.1 酚类化合物  14
    1.3.2 多糖  14
    1.3.3 无机元素  14-15
    1.3.4 齐墩果酸与熊果酸  15
    1.3.5 挥发油  15
    1.3.6 黄酮类化合物  15-18
  1.4 黄酮类成分的含量测定方法  18-19
    1.4.1 紫外可见分光光度法  18
    1.4.2 纸色谱法  18
    1.4.3 薄层色谱法  18
    1.4.4 高效液相色谱法  18-19
  1.5 黄酮类化合物的提取方法  19-20
    1.5.1 水提取法  19
    1.5.2 有机溶剂提取法  19
    1.5.3 超声波提取法  19
    1.5.4 微波提取法  19-20
    1.5.5 超临界流体萃取法  20
    1.5.6 酶解法  20
    1.5.7 双水相萃取分离法  20
  1.6 黄酮类化合物的分离纯化方法  20-23
    1.6.1 大孔树脂吸附法  20-21
    1.6.2 柱层析法  21
    1.6.3 梯度 pH 值萃取法  21-22
    1.6.4 金属试剂络合沉淀  22
    1.6.5 超滤法  22
    1.6.6 薄层层析法  22
    1.6.7 高效液相色谱法  22
    1.6.8 纸层析法  22-23
  1.7 黄酮类化合物的主要活性  23-25
    1.7.1 降血糖作用  23-24
    1.7.2 抗氧化、清除自由基功能  24
    1.7.3 防治心脑血管疾病的功能  24
    1.7.4 保肝作用  24
    1.7.5 抗肿瘤抗癌功能  24-25
    1.7.6 抗菌、抗病毒的功能  25
    1.7.7 其他作用  25
  1.8 本课题的研究意义  25
  1.9 本课题研究的主要内容  25-27
第二章番石榴叶总黄酮测定方法的探讨  27-39
  2.1 引言  27
  2.2 实验试剂与仪器  27-29
    2.2.1 实验试剂  27-28
    2.2.2 实验仪器  28-29
  2.3 实验方法  29-37
    2.3.1 供试品的制备  29
    2.3.2 对照品溶液的配制  29
    2.3.3 显色试剂的配制  29
    2.3.4 测定方法  29-31
      2.3.4.1 RP-HPLC 法  29-30
      2.3.4.2 NaNO_2-Al(NO_3)_3比色法  30
      2.3.4.3 差示分光光度法  30-31
      2.3.4.4 AlCl_3比色法  31
    2.3.5 实验结果  31-35
      2.3.5.1 RP-HPLC 法  31-33
      2.3.5.2 NaNO_2-Al(NO_3)_3比色法  33-34
      2.3.5.3 差示分光光度法  34
      2.3.5.4 AlCl_3比色法  34-35
    2.3.6 不同测定方法总黄酮含量的比较  35-36
    2.3.7 差示分光光度方法学考察  36-37
  2.4 本章小结  37-39
第三章番石榴叶总黄酮提取工艺的优化  39-47
  3.1 引言  39
  3.2 实验试剂与仪器  39-40
    3.2.1 实验试剂  39
    3.2.2 实验仪器  39-40
  3.3 单因素条件的优化  40-41
    3.3.1 料液比对提取效果的影响  40
    3.3.2 乙醇浓度对提取效果的影响  40-41
    3.3.3 提取时间对提取效果的影响  41
    3.3.4 提取次数对提取效果的影响  41
  3.4 正交实验  41
  3.5 实验结果  41-46
    3.5.1 单因素条件的优化  41-44
      3.5.1.1 料液比对提取效果的影响  41-42
      3.5.1.2 乙醇浓度对提取效果的影响  42-43
      3.5.1.3 提取时间对提取效果的影响  43-44
      3.5.1.4 提取次数对提取效果的影响  44
    3.5.2 正交实验结果  44-45
    3.5.3 验证试验  45-46
  3.6 本章小结  46-47
第四章番石榴叶总黄酮的分离纯化  47-53
  4.1 引言  47
  4.2 实验仪器与材料  47-48
    4.2.1 实验试剂  47-48
    4.2.2 实验仪器  48
  4.3 实验方法  48-50
    4.3.1 吸附率及洗脱率的计算公式  48
    4.3.2 番石榴叶总黄酮粗提物的制备  48
    4.3.3 AB-8 大孔吸附树脂纯化番石榴叶总黄酮的实验方法  48-50
      4.3.3.1 树脂的预处理方法  49
      4.3.3.2 上样浓度的确定  49
      4.3.3.3 上样量的确定  49
      4.3.3.4 洗脱溶剂和洗脱溶剂用量的选择  49
      4.3.3.5 树脂再生  49-50
  4.4 结果与分析  50-52
    4.4.1 上样浓度对总黄酮吸附率的影响  50
    4.4.2 上样量的确定  50-51
    4.4.3 洗脱溶剂和洗脱溶剂用量的选择  51-52
  4.5 本章小结  52-53
第五章番石榴叶总黄酮的体外生物活性研究  53-63
  5.1 引言  53
  5.2 实验仪器与材料  53-55
    5.2.1 实验试剂  53-54
    5.2.2 仪器与设备  54-55
  5.3 实验方法  55-58
    5.3.1 抗氧化实验  55-56
      5.3.1.1 清除 DPPH 自由基实验  55
      5.3.1.2 清除羟自由基的实验  55-56
      5.3.1.3 还原力  56
    5.3.2 α-葡萄糖苷酶抑制实验  56-58
  5.4 实验结果  58-61
    5.4.1 抗氧化实验  58-60
      5.4.1.1 清除 DPPH 自由基的实验  58
      5.4.1.2 清除羟自由基的实验  58-59
      5.4.1.3 还原力  59-60
    5.4.2 α-葡萄糖苷酶抑制实验  60-61
  5.5 本章小结  61-63
结论与展望  63-65
参考文献  65-71
攻读硕士学位期间取得的研究成果  71-72
致谢  72-73
答辩委员会对论文的评定意见  73

番石榴叶总黄酮的提取、分离纯化及体外生物活性的研究

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