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农杆菌介导的抗草甘膦基因玉米遗传转化研究

作　者: 李敬娜
导　师: 袁潜华；赵久然
学　校: 海南大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 抗草甘膦基因玉米转化 Epsps 农杆菌
分类号: S513
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

玉米是世界上重要的粮食、饲料、工业加工原料作物。杂草危害是玉米减产的重要原因之一,草甘膦作为世界上用量最大的一种广谱灭生性除草剂,利用基因工程等手段,将抗草甘膦的Epsps基因转入植物体内培育抗草甘膦玉米,对于玉米控制杂草有着非常重要的生产意义。本研究以pCAMBIA3301载体为基础,利用草甘膦抗性基因Epsps替换了原载体中的Bar基因,并引入已克隆的玉米Ubi启动子、拟南芥叶绿体转移肽Ctp序列,构建了玉米高效双元表达载体p3301ubieps。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404,并通过农杆菌介导法转化玉米幼胚,获得抗草甘膦的转基因玉米植株。PCR检测初步显示抗草甘膦Epsps基因已成功的整合到玉米基因组中,对检测阳性植株叶片用草甘膦涂抹显示转基因植株具有草甘膦初步抗性。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 引言  8-20
  1.1 草甘膦及转EPSP基因抗草甘膦玉米研究进展  8-14
    1.1.1 草甘膦  8-11
    1.1.2 EPSP合酶研究进展  11-12
    1.1.3 抗草甘膦转基因作物研究进展  12-14
  1.2 转基因作物的安全性问题  14-15
    1.2.1 转基因作物对人类产生的影响  14-15
    1.2.2 转基因作物对环境和农业生产的影响  15
  1.3 米遗传转化系统的研究进展  15-19
    1.3.1 转化受体  15-17
    1.3.2 玉米遗传转化方法  17-19
  1.4 本研究的目的意义和技术路线  19-20
2 材料与方法  20-36
  2.1 材料  20-22
    2.1.1 宿主菌与质粒  20
    2.1.2 植物材料  20
    2.1.3 PCR引物  20
    2.1.4 主要试剂与试剂配制  20-22
    2.1.5 主要仪器设备  22
  2.2 方法  22-36
    2.2.1 Ctp信号肽序列克隆  22-26
    2.2.2 中间载体的构建  26-32
    2.2.3 抗草甘膦3301载体构建  32-34
    2.2.4 米幼胚转化  34
    2.2.5 转基因玉米分子检测  34-36
3 结果与分析  36-43
  3.1 Ctp信号肽序列的克隆  36
    3.1.1 Ctp信号肽序列的扩增  36
    3.1.2 Ctp信号肽序列测序与分析  36
  3.2 中间载体的构建  36-38
    3.2.1 载体pMD18T-Ubi的酶切鉴定  36-37
    3.2.2 载体18TUbi-Ctp的酶切鉴定  37-38
    3.2.3 中间载体的酶切鉴定  38
  3.3 抗草甘膦3301载体构建  38-39
  3.4 玉米幼胚遗传转化  39-42
    3.4.1 农杆菌菌液浓度、侵染时间和共培养时间对转化的影响  39-40
    3.4.2 农杆菌侵染幼胚后筛选培养  40
    3.4.3 抗性愈伤组织的获得率  40-41
    3.4.4 转基因玉米植株的获得  41-42
  3.5 转基因玉米分子检测  42-43
4 讨论  43-45
  4.1 Epsps基因的利用  43
  4.2 转化农杆菌的鉴定  43-44
  4.3 玉米遗传转化的受体系统  44
  4.4 提高玉米遗传转化率的影响因素  44-45
  4.5 玉米转基因面临的问题及应对策略  45
5 结论  45-46
参考文献  46-50
缩略词  50-51
致谢  51

农杆菌介导的抗草甘膦基因玉米遗传转化研究

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