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原子力显微镜对10种常用单克隆抗体及人体淋巴细胞结合抗体后的观察

作　者: 侯永微
导　师: 纪小龙
学　校: 辽宁医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 原子力显微镜 淋巴细胞 细胞膜 单克隆抗体
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的应用原子力显微镜（Atomic Force Microscope, AFM）直观地观察10种常用单克隆抗体的形态、正常淋巴细胞形态、淋巴细胞结合不同抗体后细胞膜表面的形态差异，从纳米级水平提供单克隆抗体及抗体结合于淋巴细胞表面的形态图，为免疫组织化学（Immunohistochemistry）纳米级研究及抗原的精确定位和抗原异常表达现象的深入认识提供新思路。方法1、单克隆抗体用粘附沉淀法及10%福尔马林蒸汽固定法对10种常用单克隆抗体：广谱细胞角蛋白（CK-pan）、波形蛋白（Vimentin）、白细胞共同抗原（LCA）、甲状腺球蛋白（TG）、S100蛋白、细胞角蛋白7（CK7）、Dog-1、CD3蛋白、CD20蛋白、CD30蛋白进行固定，并在AFM下扫描，观察各组抗体形态。2、淋巴细胞将手术取出的新鲜淋巴结或扁桃体组织进行印片，并按照在淋巴细胞上滴加抗体的不同分为五组：第一组为空白对照组（未滴加抗体）；第二组为阴性对照组（滴加上皮膜抗原）；第三组为CD3蛋白实验组；第四组为CD20蛋白实验组；第五组为CD3蛋白和CD20蛋白实验组。应用AFM的Tapping模式对淋巴细胞抗体结合前后的细胞膜表面结构进行扫描。应用AFM软件分析系统测量和分析细胞膜表面重要参数即平均粗糙度（Ra）、最大峰高度（Rmax），然后利用SPSS13.0统计分析软件对所测得的细胞表面平均粗糙度、最大峰高度数据进行统计分析。结果1、病理学结果在光镜下观察各组淋巴细胞印片免疫组化染色结果，可看出淋巴细胞为小圆形，核浓染，胞浆少。EMA阴性对照组（扁桃体组织印片）中鳞状细胞为阳性，淋巴细胞阴性。CD3蛋白实验组、CD20蛋白实验组、CD3蛋白和CD20蛋白实验组鳞状细胞为阴性、淋巴细胞阳性，但不能分辨是否有淋巴细胞同时结合CD3蛋白和CD20蛋白。2、AFM扫描结果应用原子力显微镜分别观察10种常用单克隆抗体，其形态各不相同，在2D形态图大其致可分为四种：类圆形、不规则长杆形、三角形和菱形。单个整体细胞的轮廓各组无明显差异，淋巴细胞呈圆形、椭圆形，外周一圈狭窄的“晕环”。空白对照组细胞局部扫描见细胞膜表面高低起伏，隆起欠规则，隆起之间形成的凹陷宽度与深度不等。三个组实验组中淋巴细胞细胞膜表面形态与空白对照组相比，可见细胞膜表面有颗粒状物质附着，形状较规则、数量不等、分布不均匀。局部扫描可见颗粒物质附着于细胞膜表面隆起上，细胞膜表面隆起处更高，最大峰高度随之增加，膜表面高低起伏明显，粗糙度明显变大。在CD3蛋白和CD20蛋白实验组的局部图中显示了淋巴细胞同时结合CD3蛋白和CD20蛋白两种抗体。EMA阴性对照组较空白对照组细胞膜表面形态无明显差异。3、统计学分析结果10种单克隆抗体宽度平均数从560nm至1.90μm不等，CD3蛋白、CD20蛋白、CD30蛋白的宽度和最大峰高度小于其他各组，但平均粗糙度大于其他各组。CD3蛋白实验组、CD20蛋白实验组、CD3蛋白和CD20蛋白实验组分别与空白对照组及EMA阴性对照组间的最大峰高度和平均粗糙度的差异均有统计学意义（P<0.05）。但CD3蛋白实验组、CD20蛋白实验组、CD3蛋白和CD20蛋白实验组三组之间的最大峰高度和平均粗糙度的差异均无统计学意义（P>0.05）。结论本研究应用AFM扫描的10种单克隆抗体中形态各不相同，其2D形态图大其致可分为四种：类圆形、不规则长杆形、三角形和菱形。应用AFM观察膜抗体结合后淋巴细胞细胞膜表面结构，获得了清晰、直观的图像。CD3蛋白、CD20蛋白结合淋巴细胞后在AFM下的成像中各有不同。主要是在同一个淋巴细胞膜上显示出CD3蛋白和CD20蛋白两种抗体，为研究正常淋巴细胞以及淋巴瘤瘤细胞中抗原的异常表达和共同表达提供形态学依据，也为免疫组织化学诊断的进一步应用提供深入探讨的线索。

全文目录


中文论著摘要  4-7
英文论著摘要  7-11
英文缩略语表  11-12
前言  12-14
实验材料与方法  14-17
实验结果  17-34
讨论  34-37
结论  37-38
本研究创新性的自我评价  38-39
参考文献  39-44
附录  44-56
  综述  44-53
    参考文献  49-53
  在学期间科研成绩  53-54
  致谢  54-55
  个人简介  55-56

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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