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~(35)S-炔丙基半胱氨酸与H_2~(35)S在生物医学中的示踪研究

作　者: 沈海星
导　师: 朱建华
学　校: 复旦大学
专　业: 药剂学
关键词: 示踪研究 H2 半胱氨酸 SOD 生物学分布 大鼠 血脑屏障 小鼠 液体闪烁计数器 心肌细胞损伤 放射性核素 脑内 cysteine 超氧化物歧化酶 纹状体 PSN 灌胃给药 propargyl 放化纯度 治疗作用
分类号: R318.0
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的利用35S示踪技术,对35S-炔丙基半胱氨酸(35S-propargyl-cysteine,35S-SPRC)和H235S进行体内外的示踪研究,研究显示S-炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine, SPRC)对心肌细胞损伤有着保护作用,同时SPRC也对老年痴呆有一定的治疗作用,但用常规的分析方法检测SPRC在生物体内的含量,其灵敏度一般难以达到研究的要求,所以制备35S-SPRC,以35S-SPRC为示踪剂,用以研究SPRC在SD大鼠体内的生物学分布,以及在APP/PSN1小鼠的脑内分布,为其进一步研究提供依据。SPRC在体内介导内源性H2S的生成,同时在SPRC的作用下超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)活性提高,为了探索SOD的活性变化与H2S之间的关系,本课题运用H235S初步考察H235S与SOD在体外的结合特性。方法1.以半胱氨酸为起始原料合成非标记的SPRC,通过冷试验确定合成路线、反应条件及分析鉴定方法。在此基础上,以35S-半胱氨酸为原料合成35S-SPRC,35S-SPRC的鉴定采用TLC法及放射自显影法。按实验要求,将35S-SPRC配制成一定比活度的放射性溶液。2.取SD大鼠18只,随机分成3组,按15mg·kg-1的剂量灌胃给药35S-SPRC在不同时相将大鼠处死,取各脏器,称重、匀浆、消化,用液体闪烁计数器测定各样本的放射性活度。3.取APP/PSN1小鼠20只(每只大约30g),分成4组,每组5只,雌雄兼顾,灌胃给药35S-SPRC。在不同时相将APP/PSN1小鼠处死,取出大脑各区域,称重、匀浆、消化,用液体闪烁计数器测定各样本的放射性活度。4.考察温度、时间以及pH值对H235S与SOD的结合影响,并研究用螯合剂EDTA、DDTC抑制SOD活性中心后H235S与SOD的结合特性。结果TLC鉴定表明,标记物35S-SPRC与SPRC的Rf值一致,35S-SPRC的放化纯度大于95%。大鼠体内的生物学分布表明,35S-SPRC在大部分器官中的浓度在0.5h达到峰值。APP/PSN1小鼠脑内分布显示,35S-SPRC可以透过血脑屏障,并在纹状体和海马等区域有一定的富集。H235S有可能通过与SOD的活性中心的Cu、Zn作用影响其活性。结论运用35S示踪技术,能准确地对SPRC进行体内的示踪研究,大鼠体内的生物学分布表明,35S-SPRC在大部分器官0.5h达到峰值。APP/PSN1小鼠脑内分布显示,35S-SPRC可以透过血脑屏障,并在纹状体和海马等区域有一定的富集。同时运用H235S的示踪技术,本课题得到了SOD与H2S的初步结合特性。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
试剂、材料、仪器和实验动物  11-13
第一部分 SPRC以及类似物的合成  13-19
  一、SPRC以及类似物的合成  13-18
  三、讨论  18-19
第二部分 标记物~(35)S-SPRC的制备  19-22
  一、~(35)S-SPRC的制备  19
  二、~(35)S-SPRC放化纯度的测定  19-20
  三、讨论  20-22
第三部分 ~(35)S-SPRC的生物学研究  22-28
  一、~(35)S-SPRC的大鼠的体内生物分布  23-24
  二、APP/PSN1小鼠的脑内生物分布  24-27
  三、讨论  27-28
第四部分 H_2~(35)S与SOD结合特性的初步研究  28-34
  一、研究背景  28
  二、H_2~(35)S与SOD的结合特性  28-32
    1. 缓冲溶液的配制  29
    2. 温度与时间对H_2~(35)S与SOD结合的影响  29-30
    3. 竞争结合实验  30-31
    4. H_2~(35)S与SOD饱和结合实验  31-32
  三、讨论  32-34
第五部分 总结  34-35
参考文献  35-37
致谢  37-38
附录  38-44
文献综述  44-57
  参考文献  53-57

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医用一般科学 > 生物医学工程 > 一般性问题
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