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高效毛吸管电泳分离核苷酸类化合物及其应用研究

作　者: 冯子杰
导　师: 黄承志
学　校: 西南大学
专　业: 药物分析学
关键词: 毛细管电泳核苷酸定量分析
分类号: R914
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

核苷酸类化合物是生物体内一类非常重要的含氮有机小分子。核苷酸是核酸的基本结构单位与前身物质,与诸多生命活动息息相关；核苷酸类化合物是生物体内重要的能量载体与生理调节物质,是生物正常生长、发育、繁殖以及应对不良环境过程中至关重要的调控因子,其代谢、分布过程与诸多生化反应息息相关；核苷酸类化合物还是生物体内某些合成反应中重要的中间代谢物,其代谢紊乱会引起一系列的连锁反应,继而影响生物体的正常生理机能甚至导致死亡。当前核苷酸类化合物的分析检测方法主要包括分光光度法、荧光法、电化学法、免疫法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等。高效液相色谱法因其良好的分离效率及自动化程度高的优势,近年来逐渐成为核苷酸类化合物检测中最常用的定性定量分析方法。高效毛细管电泳法是近几十年来兴起的另一种分离分析方法,其具有分析速度快、分离效率高、样品用量少、应用范围广、分离模式多、自动化程度高、环境污染小等诸多优点,近年来作为一种高效液相色谱法的补充与替代方法得到了越来越广泛的应用。本文建立了高效毛细管电泳法用于定性定量检测核苷酸类化合物分离分析方法,并将其应用于天然产物分析及药品质量控制中,主要内容如下：1.高效毛细管电泳法分离分析严紧激素(ppGpp)研究。建立了同时分离测定细菌严紧反应信号分子ppGpp及其它严紧反应相关核苷酸的高效毛细管电泳分析方法。对于影响分离过程的毛细管规格、缓冲溶液组成、分离电压等因素进行了考察与优化并进行了方法验证。实验中还考察了生物样本中核苷酸类化合物提取常用方法对于高效毛细管电泳分析测试体系的适用性,选择了最为合适的样品预处理方法。在0.05-0.60mmol/L浓度范围内, ppGpp浓度与峰面积线性关系良好,线性方程为y=113.6x+21920, r2=0.9943。方法分析时间短、分离效率高、操作简便,能够与常用的高效液相色谱法互为补充。2.毛细管区带电泳法用于单磷酸阿糖腺苷质量控制研究。针对国标分光光度法中存在的无法有效区分单磷酸阿糖腺苷合成原料阿糖腺苷假阳性信号的问题,建立了基于毛细管区带电泳法的单磷酸阿糖腺苷原料药定量分析方法并对于影响分离测定效果的各因素进行了考察与优化,实现了目标药物与干扰物质的分离与含量测定。基于准确度、线性、稳定性、精密度、灵敏度等指标对所建立的分析方法进行了验证,结果表明方法快速、灵敏、有效、可靠,可用于单磷酸阿糖腺苷原料药及注射用粉针剂质量控制过程中。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章选题依据  10-26
  第一节研究意义  10-11
  第二节国内外研究现状  11-23
    2.1 紫外-可见分光光度法  11-12
    2.2 荧光法  12-14
    2.3 高效液相色谱法  14-17
    2.4 高效毛细管电泳法  17-23
  第三节存在的主要问题  23-24
  第四节本研究的出发点和拟解决的问题  24
  第五节研究内容、研究思路和技术路线  24-26
第二章高效毛细管电泳法分离分析严紧激素(ppGpp)研究  26-36
  第一节引言  26-27
  第二节实验部分  27-29
    2.1 实验仪器  27
    2.2 实验材料  27
    2.3 标准溶液配制及样品预处理  27-28
    2.4 毛细管电泳缓冲溶液配制及运行条件  28
    2.5 离子交换高效液相色谱对照实验  28-29
  第三节实验结果与讨论  29-34
    3.1 缓冲溶液浓度选择  29
    3.2 缓冲溶液pH选择  29-30
    3.3 毛细管长度优化  30-31
    3.4 缓冲溶液中表面活性剂添加剂的加入  31
    3.5 分离电压的选择  31-32
    3.6 方法评价  32-33
    3.7 样品处理条件优化  33-34
    3.8 离子交换高效液相色谱法对照实验  34
  第四节本章小结  34-36
第三章毛细管区带电泳法用于单磷酸阿糖腺苷质量控制研究  36-42
  第一节引言  36-37
  第二节实验部分  37-38
    2.1 实验仪器  37
    2.2 实验材料  37
    2.3 标准品及样品溶液配制  37
    2.4 毛细管预处理及实验方法  37-38
    2.5 紫外分光光度法对照试验  38
  第三节实验结果与讨论  38-41
    3.1 缓冲溶液浓度及pH优化  38
    3.2 毛细管长度及分离电压的优化  38-39
    3.3 温度选择  39
    3.4 方法验证  39-41
    3.5 实际样品测定及对照实验  41
  第四节本章小结  41-42
第四章全文总结与展望  42-44
  第一节全文总结  42-43
  第二节前景与展望  43-44
    2.1 毛细管电泳-光谱连用技术  43
    2.2 纳米材料增强毛细管电泳分离  43-44
参考文献  44-50
硕士期间科研成果  50-52
致谢  52

高效毛吸管电泳分离核苷酸类化合物及其应用研究

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