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瞬时受体势通道蛋白TRPM2在人舌鳞癌细胞增殖和凋亡机制中作用的研究

作　者: 赵凌妍
导　师: 邢树忠
学　校: 南京医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: TRPM2 舌鳞状细胞癌 SCC9 SCC25 外源性H2O2 shRNA
分类号: R739.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的研究瞬时受体势蛋白M2(transient receptor potential melastatin type2, TRPM2)在舌癌组织及舌鳞状细胞癌 SCC9、SCC25细胞株中的表达情况,比较正常组织和肿瘤组织中TRPM2在分子和蛋白水平上表达量的变化,同时观察激活TRPM2及抑制TRPM2通道在舌鳞状细胞癌细胞系中的表达对舌鳞状细胞癌SCC9. SCC25细胞株增殖和凋亡的影响,探讨TRPM2在肿瘤生成与发展中可能的作用及机制,为舌鳞状细胞癌的分子靶点治疗提供新思路及可能的理论依据。方法(1)应用免疫组织化学方法检测TRPM2在舌癌组织、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达。采用SPSS11.0软件进行统计学分析；(2)应用免疫荧光细胞染色方法检测TRPM2在SCC9、SCC25及Hela细胞系中的表达；(3)应用Western blot和Real-time PCR方法检测TRPM2在舌癌组织、正常舌体组织、舌鳞癌细胞系SCC9. SCC25、宫颈癌Hela细胞系及正常舌背上皮细胞中的表达；(4)应用MTT法、台盼蓝染色法及流式细胞仪技术检测外源性H202激活TRPM2通道对SCC9、SCC25细胞株增殖、凋亡及存活率的影响；(5)应用Western blot方法检测外源性H202对SCC9、SCC25中肿瘤及凋亡相关蛋白的表达的影响；(6)应用Western blot和Real-time PCR及流式细胞仪方法检测shRNA技术抑制TRPM2通道后的SCC9、SCC25细胞系中TRPM2、肿瘤凋亡相关蛋白的表达量及细胞凋亡率的变化；结果(1)免疫组织化学结果显示,22/23例舌癌组织中TRPM2均呈强阳性表达；0/12例舌乳头状瘤组织中TRPM2呈强阳性表达,6/12例呈弱阳性表达,余为阴性表达；1/9例正常舌体组织中TRPM2呈弱阳性表达,余为阴性表达。TRPM2在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有显著差异(p<0.05)。(2)细胞免疫荧光显示,TRPM2在舌癌细胞系SCC、SCC25中呈阳性表达,宫颈癌细胞系Hela为阳性参照。(3) Western blot和Real-time PCR显示舌癌细胞及组织中TRPM2表达水平明显高于正常舌体组织,宫颈癌细胞系Hela为阳性参照。(4)不同浓度的H202明显抑制舌癌细胞株的增殖(p<0.05),降低了舌癌细胞株的存活率(p<0.05),增加了舌癌细胞株的凋亡率(p<0.05),并呈剂量依赖关系。(5) Western blot显示加入外源性H202降低了SCC细胞株中肿瘤及凋亡相关蛋白p53、p21pro-caspase3、pro-caspase9及bcl-2的表达,并呈剂量依赖关系。(6) Western blot和Real-time PCR显示TRPM2-shRNA处理后的SCC9、 SCC25细胞系中TRPM2的表达量明显下调,肿瘤凋亡相关蛋白p53的表达量下调,p21的表达量增高,流式细胞仪检测表明舌癌细胞株的凋亡率明显增加(p<0.05)。结论(1) TRPM2在舌鳞状细胞癌组织及细胞中表达增高,提示肿瘤的发生发展可能与其表达异常有关。(2)激活舌癌细胞中的TRPM2通道抑制了细胞的增殖,促进其凋亡,并改变了舌癌细胞中肿瘤及凋亡相关蛋白的表达,提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节及TRPM2可能参与的下游调节通路。(3)选择性下调TRPM2在舌癌细胞中的表达促进了细胞凋亡,并引发了肿瘤相关蛋白表达的改变,提示TRPM2对肿瘤的发生发展具有双向调节作用,可能为舌鳞状细胞癌基因靶点治疗提供新思路。

全文目录

中文摘要  6-9
Abstract  9-12
縮略词表  12-13
前言  13-16
第一部分瞬时受体势通道蛋白TRPM2在人舌鳞状细胞癌中表达的研究  16-32
  1 材料和方法  16-27
  2 结果  27-32
第二部分激活TRPM2离子通道对SCC细胞增殖和凋亡作用及机制的研究  32-41
  1 材料和方法  32-35
  2 结果  35-41
第三部分TRPM2通道蛋白在调控舌鳞癌细胞SCC9、SCC25增殖和凋亡中的作用  41-47
  1 材料和方法  41-43
  2 结果  43-47
讨论  47-52
参考文献  52-59
综述  59-77
  参考文献  69-77
攻读学位期间发表文章情况  77-78
致谢  78

瞬时受体势通道蛋白TRPM2在人舌鳞癌细胞增殖和凋亡机制中作用的研究

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