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Smad4影响肝癌细胞SMMC-7721向间质转化的研究

作　者: 薛慧婷
导　师: 季国忠
学　校: 南京医科大学
专　业: 消化内科
关键词: Smad4 肝癌细胞 Epithelial-Mesenchymal Transition β-catenin Vimentin
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 21次
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内容摘要


目的：本课题通过体外观察在肝癌细胞SMMC-7721中，低表达Smad4对TGF-β1诱发上皮向间质转化的影响，初步探讨Smad4通过上皮向间质转化调控肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)侵袭转移的相关机制，以期为进一步解释肝癌的侵袭转移机制提供理论依据。方法：①用不同浓度的TGF-β1刺激SMMC-7721细胞，观察不同时间点的细胞增殖情况，进行计数并绘制生长曲线，选取细胞生长的最适浓度和孵育时间点；②采用Western blot法观察：a肝癌细胞SMMC-7721敲低Smad4基因后，相应蛋白的表达情况；b低表达Smad4对EMT相关标志物E-cadherin、β-catenin和Vimentin总蛋白表达水平的影响；③逆转录RT-PCR法检测低表达Smad4对β-catenin和Vimentin mRNA表达水平的影响；④细胞免疫荧光法检测Smad4、β-catenin和Vimentin在肝癌细胞SMMC-7721及其转染组中的定位及荧光表达强度。结果：①10ng/mLTGF-β1孵育48h时，细胞增殖幅度达顶峰；②SMMC-7721细胞敲低Smad4基因后，与空白对照组(control，CON)及慢病毒空载体对照组(RNA interference-NC，RNAi-NC)相比， Smad4低表达组RNAi-Smad4-12和RNAi-Smad4-2细胞中Smad4蛋白表达水平和免疫荧光强度均明显降低；③以肾小管上皮细胞为阳性参照，在CON组、RNAi-NC组及Smad4低表达组RNAi-Smad4-2细胞中，E-cadherin蛋白均呈阴性表达；④低表达Smad4后，相较于CON组和RNAi-NC组，Smad4低表达组RNAi-Smad4-2和RNAi-Smad4-12细胞中，β-catenin mRNA和相应总蛋白的表达水平均明显增加(P<0.05)，并促使其从细胞核向细胞浆转位；⑤在RNAi-Smad4-2和RNAi-Smad4-12两转染组细胞中，Vimentin的蛋白表达水平和相应胞浆荧光的表达强度比对照组明显降低(P<0.05)，相应mRNA的表达在肝癌SMMC-7721细胞及其转染组中无显著差异。结论：低表达Smad4可调控EMT相关标志物β-catenin和Vimentin的表达，从而发挥抑制肝癌SMMC-7721细胞向间质转化的作用，可能影响HCC侵袭转移的发生。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-13
材料与方法  13-31
结果  31-41
讨论  41-48
结论  48-49
参考文献  49-59
综述  59-73
  参考文献  65-73
附录 中英文缩略词表  73-74
在读期间发表的文章  74-75
致谢  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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