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系统性硬化症患者外周血调节性T细胞在Treg/Th17细胞关系失衡中的作用及FK506对其影响的研究

作　者: 刘心娟
导　师: 曾小峰
学　校: 北京协和医学院
专　业: 风湿病学
关键词: 系统性硬化症 调节性T细胞 CTLA-4 FoxP3 IL-17 FK506 FoxP3
分类号: R741
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：观察初治系统性硬化症(SSc)患者外周血单核细胞(PBMC)中的调节性T细胞(Treg)水平及其表型、亚群和功能的变化,探讨Treg在SSc患者Treg和Th17细胞间失衡中的作用。材料与方法：提取SSc患者(31例)和健康对照(33例)的PBMC,标记CD4.CD25.FoxP3 的学位论文">FoxP3及CD45RA、CTLA-4、CD69、PD-1、GITR、IL-17荧光标记抗体,用流式细胞术分析Treg及其表型和亚型的变化：分选Treg细胞及其亚群,用淋巴细胞共培养法鉴定免疫抑制功能：提取Treg细胞及其亚群mRNA,用real-time PCR法检测FOXP3. CTLA-4、IL-17A和RORC mRNA的表达水平。结果：(1)SSc患者PBMC中的CD4+CD25+FoxP3+Treg水平高于对照组(3.62±1.14vs1.97±0.75.P<0.001);SSc患者Treg细胞中CTLA-4的表达低于对照组(P=0.034),而CD69.PD.1和GITR的表达与对照组没有差异；SSc患者Treg(?)细胞中FoxP3和CTLA-4mRNA的表达均较对照组降低(P<0.05);SSc组Treg的免疫抑制功能低于对照组(P=0.034)。(2)SSc患者CD4+细胞中CD45RA-FoxP3high activated Treg细胞(aTreg,FrⅡ)亚群明显下降(0.25±0.16vs0.66±0.41among CD4+,P<0.001；12.42±5.23vs30.01±1.74among Treg,P<0.001),CD45RA-FoxP3lo非抑制性T细胞(FrⅢ)亚群显著升高(6.23±2.29vs2.90±0.91among CD4+,P<0.001；73.71±9.62vs57.96±9.90among Treg,P<0.001), CD45RA+FoxP3lo resting Treg细胞(rTreg,FrI)亚群虽无升高,但其在Treg细胞中的比例明显下降(1.87±0.94vs1.63±0.97among CD4+, P=0.320；23.19±10.60vs29.63±I1.77among Treg,P=0.025)；在对照组,FrⅡ的免疫抑制能力明显优于FrⅠ(P=0.025);但在SSc组,FrⅡ与FrⅠ的免疫抑制功能相似(P=0.974),且这两群的功能均分别低于健康对照组(P=0.011,P<0.001)；无论对照组还是SSc组,FrⅢ几乎没有免疫抑制功能。(3)CTLA-4及其mRNA在SSc患者FrⅡ和FrⅢ亚群中的表达明显下降(P<0.001,respectively),在FrⅠ亚群中的表达与对照组无差异；在对照组,FrⅡ亚群中CTLA-4的表达明显高于FrⅠ、FrⅢ及CD4+CD25-T细胞(P<0.001,respectively),而在SSc组,FrⅡ和FrⅠ亚群中CTLA-4的表达没有差异。(4)无论SSc组还是对照组,FrⅢ亚群中IL-17的表达明显高于FrI和FrⅡ(P<0.001, respectively),但两组间IL-17在FrⅢ亚群中的表达无差异；SSc患者Th17细胞明显高于对照组(P<0.001):SSc患者CD25+FoxP3+IL17+细胞在CD4+细胞中所占比例高于对照组(0.075±0.032vs0.049±0.027.P=0.029),而CD25+FoxP3+IL17-与对照组无差异。SSc患者FrⅢ亚群中IL-17A和RORC mRNA的表达亦高于对照组(P<0.001,respectively).结论：SSc患者PBMC中Treg水平升高,但功能存在缺陷；SSc患者Treg细胞中,aTreg明显下降,同时伴有功能的缺陷,这种缺陷与CTLA-4有关：SSc患者CD45RA-FoxP3loT细胞明显升高,该亚群没有免疫抑制功能,具有FoxP3+IL-17+co-express的特性；aTreg降低和CD45RA-FoxP3loT细胞的升高,是SSc患者Treg水平升高而功能缺陷的主要原因,也是SSc患者Treg与Th17细胞间失衡的主要原因。目的：观察FK506对初治系统性硬化症患者PBMC中的调节性T细胞(Treg)及其亚群水平和增殖能力的影响,初步探讨FK506对SSc患者Treg细胞及Treg和Th17细胞间失衡关系的调节作用。材料与方法：提取SSc患者(5例)和健康对照(6例)的PBMC,以Ong/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、和10ng/ml的FK506进行干预,标记CD4、CD25、FoxP3及CD45RA、IL-17荧光标记抗体,用流式细胞术分析Treg及其亚群的变化；对PBMC和分选所得CD4+细胞标记CFSE,以Ong/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、和10ng/ml的FK506进行干预,标记CD25、FoxP3及CD45RA荧光标记抗体,用流式细胞术分析细胞增殖水平；用FlowCytoMix法检测血清和细胞培养上清中IL-17A、IL-22、IL-6和IL-1β的水平。结果：(1)FK506对健康对照组的CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞水平没有影响,但中高浓度的FK506能够降低SSc患者Treg的水平；(2)FK506能够降低健康对照和SSc患者FrⅠ细胞的水平,但对FrⅠ在Treg细胞中的比例没有影响,FK506对健康对照和SSc患者FrⅡ细胞水平没有影响,但能够相对增加FrⅡ在Treg细胞中的比例,FK506能够显著降低健康对照和SSc患者FrⅢ细胞的水平；(3)SSc患者血清中IL-17A、IL-22、IL-6和IL-1β水平显著增高,FK506能够显著降低健康对照和SSc患者Th17细胞和FoxP3+IL-17+细胞水平,能够显著降低细胞培养上清中IL-17A和IL-1β的水平；(4)FK506能够显著降低CD4+细胞的增殖能力,但对FoxP3+细胞的影响小于对FoxP3+细胞的影响,FK506对SSc患者FrⅠ细胞和FrⅡ细胞的增殖能力没有影响,但能够显著的降低FrⅢ(?)田胞的增殖能力。结论：SSc患者aTreg降低和CD45RA+FoxP3loT细胞的升高,是SSc患者Treg水平升高而功能缺陷的主要原因,FK506能够通过抑制CD45RA-FoxP3lo T细胞的增殖,降低CD45RA-ToxP31o T细胞的水平,增加aTreg的相对水平,从而改善SSc患者Treg与Th17细胞间的失衡关系。

全文目录


英文缩略词  4-7
第一部分  7-11
  中文摘要  7-9
  ABSTRACT  9-11
第二部分  11-15
  中文摘要  11-13
  ABSTRACT  13-15
前言  15-21
第一部分  21-66
  研究背景  21-23
  技术路线图  23-24
  材料与方法  24-41
  结果  41-59
  讨论  59-65
  结论  65-66
第二部分  66-104
  研究背景  66-69
  技术路线图  69-70
  材料与方法  70-77
  结果  77-99
  讨论  99-103
  结论  103-104
参考文献  104-121
综述一  121-129
  参考文献  125-129
综述二  129-137
  参考文献  132-137
附录一  137-138
附录二  138-140
个人简历  140-141
致谢  141-143

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学
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