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pBud-TRAIL-IL-24的构建及其对子宫颈癌细胞的作用

作　者: 潘玥
导　师: 赖国旗
学　校: 重庆医科大学
专　业: 动物学
关键词: TRAIL IL-24 宫颈癌 HeLa
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因是近年来发现的抑癌基因，它可以特异性地诱导人类多种肿瘤细胞发生凋亡[1,2]，而对正常细胞没有明显副作用。白细胞介素24(interleutin-24,IL-24)是唯一具有增强机体免疫功能和选择性抑制肿瘤增生、诱导肿瘤凋亡作用的细胞因子。目前研究主要着力于单独的TRAIL或IL-24对肿瘤细胞的作用[3],较少探讨二者协同对肿瘤细胞的作用。Zhao等[4]研究发现IL-24能诱导和增强TRAIL的抗大肠癌活性。且本课题组前期研究已证实，TRAIL具有诱导宫颈癌细胞凋亡的作用。因此，本研究将IL-24基因克隆入真核表达质粒pBud-TRAIL-EGFP中，构建双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24并转染宫颈癌HeLa细胞，观察TRAIL和IL-24基因联合应用对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响，为寻找一种新的特异性基因治疗宫颈癌的方法奠定基础。方法：1.采用分子克隆技术，将IL-24基因插入真核表达载体pBud-TRAIL-EGFP中，构建双表达质粒pBud-TRAIL-IL-24，进行酶切鉴定和测序分析。在LipofectamineTM2000的介导下转染宫颈癌HeLa细胞，转染48h后，荧光显微镜和免疫荧光双标技术检测TRAIL和IL-24在HeLa细胞中的表达。2.以无转染的HeLa细胞为空白对照，将重组质粒pBud-TRAIL、pBud-IL-24及pBud-TRAIL-IL-24分别转染HeLa细胞，在转染24、48、72h时，MTS法检测重组质粒对HeLa细胞增殖的影响。流式细胞术方法检测重组体对宫颈癌HeLa细胞的凋亡率及细胞周期分布的影响。Transwell迁移和侵袭实验检测重组质粒对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响。结果：1.经酶切鉴定和测序分析，结果显示：真核双基因表达载体构建成功，命名为pBud-TRAIL-IL-24。重组质粒转染HeLa细胞48h后，于荧光显微镜下观察，可见增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。激光扫描共聚焦显微镜下观察，TRAIL在细胞膜及细胞质表达，IL-24表达于细胞质。2.MTS实验结果表明，与对照组，pBud-TRAIL和pBud-IL-24组相比，重组质粒pBud-TRAIL-IL-24对宫颈癌HeLa细胞有明显抑制作用(P<0.05)。流式细胞术检测各组细胞的周期分布和凋亡率，pBud-TRAII-IL-24组S期细胞和G2/M期细胞增加，G0/G1期细胞减少。相比对照组，pBud-TRAIL及pBud-IL-24组，pBud-TRAII-IL24能使宫颈癌HeLa细胞的凋亡率明显增高(P<0.05)。Transwell结果显示TRAIL和IL-24能够协同抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结论：1.真核双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24构建成功。2.重组质粒pBud-TRAIL-IL-24转染HeLa细胞后，对细胞生长起明显抑制作用，并可促进其凋亡。TRAIL和IL-24联合作用机制与细胞迁移及侵袭能力有关。

全文目录


符号说明  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-14
第一部分 真核双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24的构建和鉴定  14-25
  1 材料与方法  14-21
  2 结果  21-23
  3 讨论  23-25
第二部分pBud-TRAIL-IL-24对宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响  25-33
  1 材料与方法  25-28
  2 结果  28-30
  3 讨论  30-33
全文小结  33-34
参考文献  34-36
附图  36-40
文献综述  40-47
  参考文献  44-47
致谢  47-48
攻读学位期间发表的学术论文目录  48-49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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