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顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP的建立及重组腺病毒介导的人IL-24基因对其化疗増敏的研究

作　者: 卞国春
导　师: 汪良；董晓强
学　校: 苏州大学
专　业: 普通外科
关键词: 胃癌 耐药细胞 多药耐药 IL-24 化疗増敏 顺铂
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:1.建立耐顺铂的胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP,为化疗増敏研究提供细胞模型;2.观察腺病毒介导的人IL-24基因对胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的化疗増敏作用,简单探讨IL-24基因化疗増敏的机制。方法:采用逐步递增顺铂浓度持续作用的方法诱导胃癌细胞SGC7901耐药,培养耐顺铂的胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP。应用倒置显微镜观察耐药细胞株的形态学改变。通过细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算耐药细胞株的群体倍增时间。CCK-8法测定SGC7901/DDP细胞的耐药指数及交叉耐药性。RT-PCR检测SGC7901/DDP细胞和SGC7901细胞耐药相关基因的表达。用QBI-293A细胞扩增重组腺病毒Ad-IL-24和测定效价。检测重组腺病毒对耐药细胞的感染效率,确定合适的感染复数。用RT-PCR鉴定Ad-IL-24感染耐药细胞后IL-24基因的表达。CCK8法检测Ad-IL-24对耐药细胞株和敏感细胞株的生长抑制作用和化疗増敏作用。用RT-PCR检测感染Ad-IL-24后耐药细胞的耐药相关基因和凋亡有关基因的表达。流式细胞术检测Ad-IL-24对耐药细胞周期的影响。采用Annexin V-PE/7-AAD双荧光标记,流式细胞仪检测Ad-IL-24与DDP对耐药细胞凋亡的影响。结果:采用逐步递增顺铂浓度持续作用的方法历时6个月,提高顺铂浓度8次,成功建立能耐受1ug/ml DDP的胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP。与SGC7901细胞相比,倒置显微镜下SGC7901/DDP细胞呈现为大小不均一,形态不规则,边界欠清晰,细胞体积略增大,核不规则,出现巨细胞。从细胞生长曲线可知SGC7901/DDP细胞比SGC7901细胞增殖速度减慢,群体倍增时间延长约5小时(P<0.05)。CCK-8检测SGC7901/DDP细胞对DDP、5-FU和ADM的耐药指数分别为9.77±0.46、5.71±0.10和2.51±0.33,表明SGC7901/DDP细胞具有交叉耐药性。RT-PCR检测SGC7901/DDP细胞的耐药相关基因MDR1、MRP1和GST的表达均较SGC7901细胞升高。Ad-IL-24可在QBI-293A细胞中增殖,48h后在倒置显微镜下可见细胞变圆,呈葡萄状聚集,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,呈现高感染效率,病毒效价检测达1×109 pfu/ml。重组腺病毒感染耐药细胞SGC7901/DDP的感染复数为50MOI时比较合适,感染效率达80%以上。Ad-IL-24感染SGC7901和SGC7901/DDP细胞后,RT-PCR结果显示IL-24可在这两种细胞中表达。采用50MOI的Ad-IL-24感染细胞后, SGC7901/DDP和SGC7901细胞生长均受到抑制,在感染后第四天细胞抑制率明显增高;CCK8检测SGC7901/DDP细胞对DDP、5-FU和ADM的半数抑制浓度(IC50)均降低了,逆转倍数分别达1.57±0.13、1.45±0.08和3.76±0.57。RT-PCR结果显示Ad-IL-24能明显下调SGC7901/DDP细胞耐药相关基因MDR1、MRP1和凋亡抑制基因Bcl-2、Survivin的表达,上调促凋亡基因Bax的表达。感染Ad-IL-24后SGC7901/DDP细胞周期G2/M期和G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并在G1期前出现明显的凋亡峰。用Annexin V-PE/7-AAD双染FCM检测Ad-IL-24与DDP联合组的细胞凋亡率明显高于对照组、纯药物或单基因治疗组。结论:1.通过逐步递增顺铂浓度持续诱导的方法建立了顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP。2. SGC7901/DDP细胞株具有多药耐药特征,其耐药机制与群体倍增时间延长及多药耐药基因MDR1、MRP1和GST表达上调有关。3.腺病毒为载体的IL-24基因对耐药细胞SGC7901/DDP具有化疗増敏作用,其化疗増敏作用与上调促凋亡基因Bax表达,下调凋亡抑制基因Bcl-2、Survivin和耐药相关基因MDR1、MRP1表达有关。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
前言  10-14
材料与方法  14-23
结果  23-37
讨论  37-42
结论  42-43
展望  43-44
参考文献  44-52
综述  52-60
  参考文献  57-60
中英文缩略词对照表  60-62
攻读学位期间公开发表的文章  62-63
致谢  63-64

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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