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骨痹合剂干预C518大鼠膝关节退变软骨细胞的机制研究

作　者: 张磊
导　师: 包可; 王琦
学　校: 云南中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 骨痹合剂 KOA 软骨细胞机制研究
分类号: R684.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：膝关节骨性关节炎(KOA)是中老年人最常见的退行性骨关节疾病。其中,中医药在治疗KOA时有独特的优势。因此,我们开展了使用中药复方制剂—骨痹合剂干预C518大鼠膝关节退变软骨细胞的机制研究,这不仅丰富和发展了中医药从痹论治KOA产生疗效的可能生物学基础和现代科学内涵,而且还建立了从痹论治KOA的现代生物学研究思路和方法学平台。方法：首先,探讨了近10年中医药治疗KOA的用药规律。同时,选取人膝关节正常、退变软骨组织和退变软骨细胞,以及C518大鼠膝关节正常和退变软骨细胞,用多种染色手段对其进行形态特征观察。最后,用MTT法检测骨痹合剂对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖的影响,并对骨痹合剂干预后的C518大鼠膝关节退变软骨细胞进行COL-Ⅱ、MMP-13免疫组化染色,探讨其作用机制。结果：(1)骨痹合剂基本符合近10年中医药治疗KOA的用药规律。(2)在人膝关节退变软骨细胞中,可见原代细胞形态呈长梭形和多角形,细胞核变形、萎缩,传代细胞更甚。同时,人膝关节退变软骨细胞中COL-Ⅰ和COL-Ⅱ免疫荧光均为低表达,COL-Ⅹ、bFGF、MMP-13免疫荧光均为高表达。人膝关节退变软骨组织病理变化可见软骨变薄,表面有侵蚀,深层细胞有肥大样和纤维样改变。(3)C518大鼠膝关节退变软骨细胞的病理变化可见细胞形态呈长梭形和多角形,随着退变加剧,增殖速度放缓、数量减少,同时出现衰老、死亡。(4)在药物对细胞增殖的影响上,在同一时间点的不同浓度中,各组之间都有显著性差异(P<0.01)。在同一时间点的骨痹合剂组、氨糖美辛组中,各浓度之间都有显著性差异(P<0.01)。在生理盐水组中,各浓度之间都无显著性差异(P>0.05)。在COL-Ⅱ、 MMP-13表达水平上,各组之间都有显著性差异(P<0.01)。结论：(1)骨痹合剂基本符合中医药治疗KOA的理论基础。(2)人膝关节软骨细胞在发生退变时COL-Ⅰ和COL-Ⅱ会减少,退变的软骨细胞主要呈肥大样变和纤维样变,并伴有MMP-13的释放。(3)骨痹合剂对C518大鼠膝关节退变软骨细胞有促进增殖的作用,并且细胞对药物浓度有依赖作用。(4)骨痹合剂能调节C518大鼠膝关节退变软骨细胞中COL-Ⅱ、MMP-13的表达水平,从而延缓KOA的病变发展。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-8
符号与说明  8-9
前言  9-10
第一部分近10年中医药治疗KOA的用药规律研究  10-20
  1 资料与方法  10-11
  2 结果  11-14
  3 讨论  14-20
第二部分人膝关节正常、退变软骨组织以及退变软骨细胞形态特征观察  20-30
  1 材料和方法  20-23
  2 结果  23-27
  3 讨论  27-30
第三部分 C518大鼠膝关节正常和退变软骨细胞形态特征观察  30-36
  1 材料和方法  30-31
  2 结果  31-34
  3 讨论  34-36
第四部分骨痹合剂对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖和COL-Ⅱ、MMP-13表达的影响  36-46
  1 材料与方法  36-37
  2 结果  37-44
  3 讨论  44-46
结论  46
主要特点及价值  46
问题与展望  46-47
参考文献  47-52
文献综述  52-59
  参考文献  56-59
研究成果  59-61
致谢  61-62
相关附件材料  62-63
附件  63-112

骨痹合剂干预C518大鼠膝关节退变软骨细胞的机制研究

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