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疏肝益肾方对三苯氧胺耐药乳腺癌的实验研究

作　者: 高雅静
导　师: 卢雯平
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: AKT MCF-7 MAPK通路耐药乳腺癌疏肝益肾方三苯氧胺 VEGF通路
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：研究疏肝益肾方对三苯氧胺耐药的乳腺癌细胞MCF-7LCC9的逆转耐药作用，并明确其发挥作用的机制.方法：1.雌性大鼠去势手术后,分别用疏肝益肾方水煎剂(高、中、低剂量组)、三苯氧胺(TAM组)溶液、生理盐水(空白组)灌胃制备大鼠含药血清.2.MTT法观察高、中、低剂量疏肝益肾方组、TAM组、空白组的含药血清对野生型MCF-7WT细胞和耐药型乳腺癌MCF-7LCC9细胞体外增殖的抑制作用。3. TRANSWELL小室法和Wound healing划痕实验观察疏肝益肾方组、TAM组、空白组的含药血清对野生型MCF-7WT细胞和耐药型MCF-7LCC9(?)(?)胞体外横向、纵向迁移力的抑制作用。4.使用基因芯片检测疏肝益肾方血清组、空白血清组体外干预后的MCF-7LCC9细胞基因表达谱的变化,从中发现差异表达的基因。5.通过GO-Analysis对筛选出的差异基因进行显著性功能分析,得到差异基因所参与的显著性、靶向性功能。6.以显著性功能为研究对象,构建功能间所属关系的网络图GO-Map,体现性状差异的系统性功能变化特点。7.对筛选出的差异基因进行显著性Pathway分析,得到差异基因所参与的显著性Pathway。8.利用显著性Pathway为研究目标,构建Pathway之间的相互作用网络Path-Net,从宏观、系统的角度研究信号转导过程。9.基于实验已经验证的基因和基因之间的关系,构建差异基因的信号转导网络(Signal-Net),研究差异基因间的信号转导过程,并从网络中得到起信号中枢作用的基因。结果：1.疏肝益肾方、TAM均能抑制MCF-7WT细胞增殖,48h时疏肝益肾方高剂量组抑制作用最明显。疏肝益肾方高剂量组对MCF-7LCC9细胞增殖的抑制作用也是在48h时做显著,而TAM对MCF-7LCC9细胞的抑制作用不明显。2.疏肝益肾方高剂量组、TAM组作用48h后,对MCF-7WT和MCF-7LCC9的迁移力均有一定的抑制作用。3.基因芯片对中药高剂量组和空白组处理后的MCF-7LCC9进行分析,采用倍数法(1.3倍)共筛选出1867个差异基因,其中,表达上调的有1436个基因,基因表达下调的有931个基因。4.对筛选出的差异基因进行GO-Analys is,发现上调差异基因的显著性功能分析结果133项,涉及mRNA的处理、代谢过程、蛋白质的转运等。下调差异基因的显著性功能分析结果85项,涉及刺激反应性、凋亡的正调控等等。5.对筛选出的差异基因进行显著性Pathway分祈,得到上调差异基因参与的显著性信号转导通路27项,涉及RNA的降解、嘧啶的代谢、RNA聚合酶等通路；下调差异基因参与的显著性信号转导通路21项,涉及MAPK通路VEGF通路、钙信号通路等。结论：1.疏肝益肾方对MCF-7LCC9的增殖、迁移力有抑制作用,且中药高剂量组抑制作用最强。2.疏肝益肾方逆转MCF-7LCC9三苯氧胺耐药的机制可能与抑制MAPK通路、VEGF通路等通路,下调AKT3的表达有关。

全文目录

目录  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
英文缩略词表  9-10
综述  10-17
  1. 研究意义  10
  2. 国外研究现状  10-15
    2.1 三苯氧胺耐药机制的研究进展  10-15
    2.2 逆转耐药的研究  15
    2.3 目前的问题  15
  3. 中医相关治疗乳腺癌现状  15-17
第一部分逆转TAM耐药的药效实验研究  17-36
  实验一中药含药血清制备  17-22
    实验材料  17-18
    实验方法  18-20
    结果  20
    讨论  20-22
  实验二 MTT法测定疏肝益肾方对三苯氧胺耐药乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用  22-30
    实验材料  22-23
    实验方法  23-25
    结果  25-29
    讨论  29-30
  实验三 Transwell小室和wound healing法测定疏肝益肾方对三苯氧胺耐药乳腺癌细胞MCF-7迁移力的影响  30-36
    实验材料  30-31
    实验方法  31-33
    结果  33-35
    讨论  35-36
第二部分应用基因芯片技术研究疏肝益肾方逆转TAM耐药的机制  36-50
  实验材料  36-37
  实验方法  37-39
  结果  39-41
  讨论  41-50
结论  50-51
附录  51-58
参考文献  58-66
致谢  66-67
个人简历  67-68

疏肝益肾方对三苯氧胺耐药乳腺癌的实验研究

内容摘要

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