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循环中三种microRNA与乳腺癌关系的研究

作　者: 张学营
导　师: 甄林林
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: 乳腺癌微小RNA 全血血清血浆实时定量PCR
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

背景乳腺癌(Breast cancer)好发于女性，女性乳腺癌占全部乳腺癌病例的90%以上，是女性常见的恶性肿瘤之一。自20世纪70年代未以来，其发病率一直居女性恶性肿瘤的前列，并且全球以每年2%的速度递增。全世界每年约有120万女性发生乳腺癌，有50万女性死于乳腺癌，发病率占全年恶性肿瘤7～10%。我国在世界上属于乳腺癌低发国家，但是在不同地区存在差异，总的特点是沿海城市高于内地，经济发达、人口密度高的城市高于经济落后、人口密度低的城市，且其发病率也呈上升趋势。微小RNA(microRNA或miRNA)是长度约21～25核苷酸（nucleotide，nt）的小型、单链、非编码核糖核酸（Ribonucleic acid, RNA），这些miRNA能够识别特定的目标信使RNA（messenger RNA, mRNA），并在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和（或）抑制翻译过程,发挥调控基因表达作用,参与个体发育、干细胞分化和疾病发生与发展。随着近年来研究的不断深入，miRNA在肿瘤诊断、治疗和预后判断方面的作用逐渐为人们所认识，miRNA在肿瘤的生物学行为的各个方面都起着关键性的作用，它们可能是肿瘤的致癌基因或抑癌基因，同时又可能是肿瘤新的治疗靶点。循环中miRNA是由肿瘤细胞分泌的，有研究表明循环中miRNA与肿瘤的临床病理特征密切相关，因此研究循环中miRNA与肿瘤的关系，在包括乳腺癌在内的恶性肿瘤的早期诊断、治疗以及预后判断方面有着重要意义。目的1．检测全血、血浆及血清中的三种乳腺癌相关miRNA表达水平，并探索它们之间的关系。2．通过分析全血、血浆及血清中三种乳腺癌相关miRNA的表达水平，探索乳腺癌患者与非乳腺癌患者之间三种miRNA的表达差异。3．通过分析全血、血浆及血清中miRNA的表达水平，探索循环中miRNA的表达水平与乳腺癌临床病理特征之间的关系。方法1．根据实验设计的要求，于南京医科大学附属淮安第一医院甲状腺、乳腺外科，收集符合入选条件的病例。记录入选病例的基本资料：姓名、性别、年龄；病人的常规化验检查结果：血常规、肝肾功能；收集记录病人的辅助检查结果：超声、钼靶、CT以及全身骨扫描。然后于手术前采集病人的血液标本，包括抗凝血和非抗凝血两部分；于手术中采集相应的组织标本。2．查找三种miRNA的基因序列，设计并验证三种miRNA以及内参基因的上游引物；对所采集到的血液标本（包括抗凝血以及非抗凝血标本)进行全血、血浆以及血清的分离，完成后，分别提全血标本中的总RNA和血浆及血清中的miRNA富集部分，进行互补DNA(complementary DNA，cDNA)合成；采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantition polymerase chain reaction，实时定量PCR或real-time qPCR)的方法，检测其中三种乳腺癌相关miRNA的表达水平。3．对采集的乳腺癌以及非乳腺癌患者的组织标本进行病理学检查，对乳腺癌的组织标本进行免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）检查，明确乳腺癌组织标本中雌激素受体（Estrogen receptor，ER）、孕激素受体（Progesteronereceptor, PR）的表达情况。结果1.全血、血浆及血清中的三种乳腺癌相关miRNA表达量之间关系通过对实时定量PCR结果分析发现，血浆与血清间三种miRNA的表达水平基本相同，两类标本间三种miRNA以及两种内参基因的表达水平差异没有统计学意义；而全血中三种miRNA的表达水平明显高于血浆和血清中的表达水平。2.乳腺癌患者与非乳腺癌患者间全血、血浆、血清中三种乳腺癌相关miRNA的表达情况通过对乳腺癌以及非乳腺癌患者全血、血浆以及血清中三种miRNA表达水平分析，发现乳腺癌与非乳腺癌患者相比，全血、血浆及血清中miR-155表达水平上调，miR-200c表达水平下调，差异有统计学意义，miR-31表达水平在两者的差异无明显统计学意义。3.血浆和血清中三种乳腺癌相关miRNA的表达水平与乳腺癌的关系和淋巴结转移阴性的乳腺癌患者相比，淋巴结阳性患者血浆和血清中miR-155的表达上调，miR-200c的表达下调，差异有统计学意义，两者间miR-31的表达差异无统计学意义；与Ⅲ期乳腺癌相比，0、Ⅰ和Ⅱ期乳腺癌患者血浆和血清中miR-155的表达下调，miR-200c的表达上调，差异有统计学意义，miR-31的表达水平下调，差异无统计学意义；和肿瘤﹥2cm的乳腺癌相比，肿瘤≤2cm的乳腺癌患者血浆和血清中miR-31和miR-155表达下调，miR-200c的表达上调，差异有统计学意义；和ER阴性的乳腺癌患者相比，ER阳性的乳腺癌患者血浆和血清中miR-155和miR-200c的表达下调，差异有统计学意义，两者间miR-31的表达差异无统计学意义；和PR阴性的乳腺癌相比，PR阳性的乳腺癌患者血浆和血清中miR-155的表达下调，差异有统计学意义，两者间miR-31和miR-200c的差异无统计学意义。4.全血中三种乳腺癌相关miRNA的表达水平与乳腺癌临床病理特征间的关系和淋巴结转移阴性的乳腺癌患者相比，淋巴结阳性患者全血中miR-155的表达上调，miR-31和miR-200c的表达水平下调，差异有统计学意义；与Ⅲ期乳腺癌相比，0、Ⅰ和Ⅱ期乳腺癌患者全血中，miR-155的表达下调，miR-200c的表达上调，差异具有统计学意义，两者间miR-31的表达差异无统计学意义；在肿瘤≤2cm的乳腺癌患者全血中，miR-31和miR-155表达水平比肿瘤﹥2cm的表达下调，miR-200c的表达水平上调，差异有统计学意义；在ER阳性的乳腺癌患者全血中，miR-155和miR-200c的表达水平较ER阴性患者下调，差异有统计学意义，两者间miR-31的表达差异无统计学意义；在PR阳性的乳腺癌患者全血中，miR-155的表达水平较PR阴性患者下调，差异有统计学意义，两者间miR-31和miR-200c的表达差异无统计学意义。结论1.全血中三种乳腺癌相关miRNA的表达水平高于血浆、血清中的表达水平；血浆与血清中三种miRNA的表达水平基本相同。2.乳腺癌患者全血、血浆以及血清中miR-155的表达水平高于非乳腺癌患者，miR-200c的表达水平低于非乳腺癌患者，两者间miR-31的表达无明显差异。3.全血、血浆以及血清中miR-31、miR-155及miR-200c的表达水平与乳腺癌的临床病理特征密切相关。

全文目录

中文摘要  5-9
Abstract  9-14
前言  14-15
材料和方法  15-28
结果  28-36
讨论  36-40
结论  40-41
参考文献  41-49
综述  49-66
  参考文献  60-66
常用英文缩写  66-68
发表论文及科研工作总结  68-69
致谢  69

循环中三种microRNA与乳腺癌关系的研究

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