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油酸和1，25（0H）_2D_3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用

作　者: 杨海静
导　师: 陈卫; 权金星
学　校: 兰州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 人主动脉血管平滑肌细胞 油酸 TLR4 IL-6 IL-8 MCP-1 1,25（OH）2D3
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：探讨油酸对体外培养的人主动脉血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用。方法：采用不同浓度的油酸处理人主动脉血管平滑肌细胞不同时间,未加药物组为对照组,LPS组作为阳性对照。MTT法检测细胞增殖活性；实时荧光定量PCR法检测细胞TLR4、IL-6、IL-8及MCP-1mRNA的表达水平；Western印迹法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1的蛋白表达。结果：油酸在50～200μmol/L浓度之间可促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度则抑制细胞的增殖(P<0.05)；油酸上调人主动脉血管平滑肌细胞TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1mRNA表达的最大幅度分别为对照组的6.5倍、7.4倍、7.4倍和7.1倍(P<0.05)。200μmol/L油酸处理人主动脉血管平滑肌细胞后TLR4蛋白表达的灰度值比值为(1.70±0.62),与对照组(0.29±0.22)比较,差异有统计学意义(P<0.盯)；IL-6、IL-8和MCP-1蛋白的表达水平最大上调幅度分别为对照组的2.16倍、1.93倍和2.06倍(均P<0.05)。结论：油酸可调节人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性且具有明显的时间-剂量依赖性；油酸可诱导人主动脉血管平滑肌细胞TLR4mRNA及蛋白质、炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1mRNA与蛋白水平表达。油酸诱导人主动脉血管平滑肌细胞产生炎症反应可能是通过激活TLR-4信号通路而发挥作用的。目的：探讨1,25(OH)2D3(1,25-dihydroxyvitamin D3)对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用。方法：不同浓度1,25(OH)2D3干预人主动脉血管平滑肌细胞,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中炎症因子IL-6、IL-8及MCP-1mRNA及TLR4基因mRNA的表达水平。结果：1,25(OH)2D3抑制了人主动脉血管平滑肌细胞IL-6、IL-8、MCP-1mRNA水平的表达。与对照组比较,IL-6、IL-8和MCP-1mRNA表达的最大下调幅度约为58%、69%和43%(P<0.05)。小剂量(1nmol/L)1,25(OH)2D3也明显抑制了TLR4mRNA的表达(P<0.05)。结论：1,25(OH)2D3抑制了人主动脉血管平滑肌细胞中炎症因子IL-6、IL-8、 MCP-1mRNA的表达；小剂量1,25(OH)2D3明显抑制了TLR4mRNA表达；1,25(OH)2D3很有可能通过下调TLR4信号表达而抑制人主动脉血管平滑肌细胞中炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1的表达。

全文目录


第一部分  3-6
  中文摘要  3-4
  Abstract  4-6
第二部分  6-11
  中文摘要  6-7
  Abstract  7-11
第一部分 油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子的表达  11-42
  前言  11-14
    1、糖尿病大血管病概述  11-12
    2、TLR4与糖尿病大血管动脉粥样硬化病变的关系  12
    3、游离脂肪酸在糖尿病大血管动脉粥样硬化发生中的作用  12-14
  材料和方法  14-28
    1. 材料  14-18
      1.1 主要仪器和设备  14
      1.2 主要试剂  14-15
      1.3 试剂盒  15-16
      1.4 细胞株  16
      1.5 引物  16
      1.6 主要试剂配制方法  16-18
    2. 方法  18-28
      2.1 细胞培养  18-19
      2.2 MTT比色实验  19-20
      2.3 提取细胞总RNA  20
      2.4 反转录反应  20-21
      2.5 实时荧光定量PCR反应  21-23
      2.6 Western blot实验  23-25
      2.7 酶联免疫吸附试验(ELISA)  25-26
      2.8 统计学分析  26-28
  结果  28-35
  讨论  35-37
  结论  37-38
  参考文献  38-40
  缩略词表  40-42
第二部分 1，25(0H)_2D_3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子表达的抑制作用  42-60
  前言  42-44
    1、维生素D代谢及其生理学作用  42-43
    2、维生素D与2型糖尿病大血管病变  43-44
  材料和方法  44-51
    1. 材料  44-46
      1.1 主要仪器和设备  44
      1.2 主要试剂  44-45
      1.3 试剂盒  45
      1.4 细胞株  45
      1.5 引物  45
      1.6 主要试剂配制方法  45-46
    2. 方法  46-51
      2.1 细胞培养  46-47
      2.2 提取细胞总RNA  47
      2.3 反转录反应  47-48
      2.5 实时荧光定量PCR反应  48-50
      2.6 统计学分析  50-51
  结果  51-53
  讨论  53-55
  结论  55-56
  参考文献  56-59
  縮略词表  59-60
在学期间研究成果  60-61
基金资助  61-62
致谢  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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