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半相合基因效应性T淋巴细胞治疗宫颈癌的小鼠模型研究

作　者: 邢艳超
导　师: 范秀华
学　校: 河北医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 半相合基因 效应性T细胞 宫颈癌 STAT3 P-STAT3 TGF-β1 IFN-γ
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：本实验以小鼠宫颈癌U14细胞接种C57BL/6雌鼠，建立小鼠宫颈癌移植瘤模型。体外培养C57BL/6雌鼠及半相合基因鼠CB6F1（BABL/C×C57BL/6的杂交子一代，雌性）来源的效应性T淋巴细胞，作用于荷瘤C57BL/6雌鼠，检测其对小鼠瘤组织中的STAT3、P-STAT3、TGF-β1、IFN-γ表达的影响，观察各组小鼠生存期、GVHR的严重程度。探讨同源基因或半相合基因效应性T淋巴细胞过继免疫治疗的抗瘤效果，为临床宫颈癌的治疗提供新思路。方法：1体外培养小鼠宫颈癌U14细胞，建立C57BL/6小鼠宫颈癌移植瘤模型。2肿瘤抗原致敏的成熟DC制备：将C57BL/6、CB6F1小鼠骨髓细胞，体外加入rmGM-CSF、rmIL-4、肿瘤抗原裂解液，LPS诱导培养即可得到肿瘤抗原致敏的成熟DC。流式细胞仪分析其CD11c+、MHC II+、CD86+细胞表面分子表达情况。3效应性T细胞的制备：将C57BL/6、CB6F1小鼠脾细胞，经淋巴分离液分离获得淋巴细胞，尼龙毛柱吸附法收集T淋巴细胞。培养T淋巴细胞2天后，加入肿瘤抗原致敏的成熟DC，培养5天，即可得到效应性T细胞。4LDH法效应性T细胞体外杀伤实验:将C57BL/6、CB6F1效应性T细胞与宫颈癌U14细胞以50:1、25:1比例混合，混合8小时后，酶标仪检测培养液上清中LDH含量，计算效应性T细胞对肿瘤细胞的杀伤率。5实验动物分组及治疗：将荷瘤小鼠C57BL/6完全随机分至3组，每组8只。PBS组（A组）：0.5ml PBS鼠尾静脉注射，每5天1次，共注射3次；同源基因效应性T细胞组（B组）：1×106个/0.5ml C57BL/6来源效应性T细胞鼠尾静脉注射，每5天1次，共注射3次；半相合基因效应性T细胞组（C组）：1×106个/0.5ml CB6F1来源效应性T细胞鼠尾静脉注射，每5天1次，共注射3次。观察各组小鼠生存期。6免疫组化SP法检测荷瘤小鼠C57BL/6肿瘤组织STAT3、P-STAT3、TGF-β1、IFN-γ表达情况，采用图像分析软件对免疫组化结果进行分析，用阳性细胞百分比表示其含量。7HE染色观察各组小鼠瘤组织坏死情况、肝及小肠的病理改变。结果：1背部皮下接种1×106U14细胞的C57BL/6小鼠，约7天后肉眼可见接种部位肿块直径达0.5cm。2肿瘤抗原致敏的成熟DC：细胞培养7天后,大部分悬浮生长，成簇明显，细胞表面可见毛刺状突起。流式细胞仪分析其CD11c+MHC II+细胞纯度为92.4%，CD11c+CD86+细胞纯度为88.8%。3LDH法效应性T细胞体外杀伤实验：效靶比为50:1条件下C57BL/6、CB6F1效应性T细胞对U14细胞杀伤率差异无统计学意义（P>0.05）；效靶比25:1条件下C57BL/6、CB6F1效应性T细胞对U14细胞杀伤率差异无统计学意义（P>0.05）。4各组老鼠生存期：A组B组、A组C组小鼠生存期差异有统计学意义（P<0.05），B组C组小鼠生存期差异无统计学意义（P>0.05）。5C57BL/6小鼠瘤组织免疫组化结果：A组和C组小鼠相比，瘤组织中STAT3、P-STAT3、TGF-β1、IFN-γ表达量差异有统计学意义（P<0.05）。A组和B组小鼠相比，瘤组织中P-STAT3、TGF-β1表达量差异有统计学意义（P<0.05）；瘤组织中STAT3、IFN-γ表达量差异无统计学意义（P>0.05）。B组和C组小鼠相比，瘤组织中P-STAT3、TGF-β1、IFN-γ表达量差异有统计学意义（P<0.05）；瘤组织中STAT3表达量差异无统计学意义（P>0.05）。6HE染色结果：HE染色观察各种小鼠瘤组织，B组和C组小鼠瘤组织较A组小鼠瘤组织坏死面积大。各组小鼠肝及小肠未见明显病理变化。结论：1在体外实验中，CB6F1来源的效应性T细胞与C57BL/6来源的效应性T细胞都能够杀伤小鼠宫颈癌U14细胞，且两者杀伤率未见统计学差异。2C57BL/6来源的效应性T细胞过继免疫治疗，拮抗TGF-β1表达，P-STAT3低表达。3CB6F1来源的效应性T细胞过继免疫治疗，除拮抗TGF-β1表达、P-STAT3低表达外，STAT3低表达、IFN-γ高表达。4C57BL/6、CB6F1来源的效应性T细胞作用于荷瘤C57BL/6小鼠未见明显GVHR。5CB6F1来源的效应性T细胞过继免疫治疗与C57BL/6来源的效应性T细胞过继免疫治疗都能够延长荷瘤C57BL/6小鼠的生存期，且两者生存期未见统计学差异。

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中图分类: > 医药、卫生 > 医学研究方法 > 实验医学、医学实验 > 医用实验动物学
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