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三七总皂苷抑制Hela细胞增殖的实验研究

作　者: 邹存华
导　师: 赵淑萍
学　校: 青岛大学
专　业: 妇产科学
关键词: 三七总皂苷 Hela细胞 mTOR信号通路
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的通过检测不同浓度三七总皂苷(Panax notognseng, PNS)作用于宫颈癌Hela细胞不同时相细胞增殖情况mTOR介导的蛋白质翻译信号通路中4E-BP1、S6K1、 mTOR蛋白的表达情况及其下游效应分子VEGF蛋白的含量,探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其可能的分子机制,为PNS对宫颈癌治疗的临床应用提供理论依据。方法应用MTT法检测不同浓度(50、100、200、400μ g/mL)的PNS作用于Hela细胞不同时相(24h、48h、72h)后的增殖抑制率；荧光素酶报告基因检测技术检测PNS作用Hela细胞24h后细胞中荧光素酶报告基因(Luciferase, LUC)的表达；应用Western-Blot技术检测200μ g/mL PNS作用于Hela细胞前后4E-BP1、S6K1、 mTOR蛋白及其磷酸化水平的变化；应用ELISA技术检测PNS作用于Hela细胞24h前后细胞中VEGF蛋白的含量。结果(1)MTT法检测发现,三七总皂苷对宫颈癌Hela细胞生长增殖具有明显的抑制作用(P均<0.05),且呈时间和剂量依赖性,在相同浓度的三七总皂苷作用下,随作用时间的延长,对Hela细胞的抑制作用逐渐增强,差别有显著性(P均<0.05)；在同一时间下,三七总皂苷的浓度越高,对宫颈癌Hela细胞的抑制作用越强,差别有显著性(P均<0.05)。(2)荧光素酶报告基因检测结果显示三七总皂苷作用后Hela细胞中荧光素酶报告基因LUC的含量明显低于对照组,差别有显著性(P<0.05),并且随着PNS浓度增加,Hela细胞中相对光单位值(RLU)越来越低,差异有显著性意义(P均<0.05)。(3) Western-Blot技术检测发现,200μ g/mL的三七总皂苷作用于Hela细胞最初的2h内,P-S6K1和P-4E-BP1、P-mTOR蛋白表达均减少,而作用于Hela细胞24h后,细胞中总蛋白S6K1、4E-BP1和mTOR的表达也明显降低,差别有显著性(P均<0.05)。(4) ELISA实验结果表明,PNS作用于Hela细胞24h后其VEGF蛋白含量明显下降,差别有显著性(P<0.05)。结论三七总皂苷对宫颈癌Hela细胞体外生长具有明显抑制作用,其机制可能是三七总皂苷通过阻断细胞的mTOR信号通路,从而抑制了mRNA翻译效率,影响细胞内蛋白质的表达量,同时三七皂苷可能还可抑制翻译起始复合物eIF4F的形成,下调肿瘤促血管生长因子VEGF的表达,影响肿瘤新生血管形成,进而抑制Hela细胞增殖,从而为三七总皂苷应用于宫颈癌的临床治疗提供有价值的参考。

全文目录


摘要  2-4
Abstract  4-8
引言  8-10
第一章 实验材料  10-17
  1.1 细胞来源  10
  1.2 主要实验试剂  10-12
  1.3 主要仪器和设备  12-13
  1.4 主要试剂溶液的配制  13-17
第二章 实验方法  17-25
  2.1 细胞处理  17-18
  2.2 三七总皂苷lOmg/mL母液的配制  18
  2.3 MTT法检测三七总皂苷对宫颈癌Hela细胞增殖的影响  18-19
  2.4 pCMV-LUC-pcDNA3.1重组质粒转染Hela细胞  19
  2.5 荧光素酶报告基因检测  19-20
  2.6 Western-blot检测细胞增殖相关蛋白4E-BP1、S6K1、mTOR  20-21
  2.7 Western-Blot检测4E-BP1、S6K1、mTOR磷酸化水平  21-23
  2.8 ELISA法检测VEGF的含量  23-24
  2.9 数据处理及统计学分析  24-25
第三章 实验结果  25-32
  3.1 PNS对Hela细胞增殖的影响  25-26
  3.2 荧光素酶报告基因检测  26-27
  3.3 Western Blot方法检测mTOR通路中各蛋白表达水平  27-29
  3.4 Western Blot方法检测mTOR通路蛋白磷酸化水平  29-30
  3.5 ELISA法检测Hela细胞上清液中VEGF的含量  30-32
第四章 讨论  32-34
结论  34-35
参考文献  35-37
综述  37-46
  综述的参考文献  43-46
攻读学位期间的研究成果  46-47
致谢  47-48

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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