学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

白花蛇舌草抗肿瘤活性成分的研究

作　者: 于莉
导　师: 郭兴杰
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药物分析学
关键词: 白花蛇舌草 化学成分 肿瘤细胞增殖抑制活性 质量控制方法 药物动力学 MTT法 HPLC-UV法 HPLC-ESI/TOF-MS法
分类号: R284
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
下　载: 113次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.[Oldenlandia diffusa（Willd.）Roxb.]的干燥全草。本品作为具有抗癌活性的中草药被广泛用于治疗各种肿瘤,尤其用于消化系统肿瘤,如食道癌、胃癌、肝癌、直肠癌等的治疗。本文以白花蛇舌草为研究对象,对其化学成分、体外药理活性、质量控制方法和体内药物动力学进行了初步研究。具体研究内容如下:采用硅胶柱色谱、反相制备液相色谱、聚酰胺柱色谱和葡聚糖凝胶色谱等多种分离技术从白花蛇舌草药材的90%乙醇提取物中分离得到17个化合物,根据理化反应和光谱、波谱数据共鉴定了15个。其中1个新化合物:2,7-二羟基-3-甲基蒽醌;1个属首分化合物:3,4-二羟基苯甲酸甲酯。采用液相色谱/飞行时间质谱联用技术（HPLC-ESI/TOF-MS）对白花蛇舌草提取液中的化学成分进行定性分析。在正、负离子扫描方式下,以各色谱峰的一级和二级质谱裂解信息为依据,经文献检索或与对照品对照共鉴定了8个成分,分别为:去乙酰基车叶草苷酸、去乙酰基车叶草苷、鸡屎藤次苷、10-乙酰基鸡屎藤次苷、车叶草苷、对香豆酸、反式-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯、顺式-6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯。采用MTT比色法,以肝癌BEL-7402、胃癌SGC-7901和乳腺癌MCF-7为实验细胞株,分别考察了白花蛇舌草60%乙醇提取物以及从白花蛇舌草中分离得到的8个单体化合物对三种肿瘤细胞株的增殖抑制作用。实验结果表明:白花蛇舌草60%乙醇提取物对三种肿瘤细胞株均表现出不同程度的增殖抑制作用,其中对胃癌细胞SGC-7901的抑制活性最强,IC50值为4.81μg/mL。八个单体化合物中,仅2,7-二羟基-3-甲基蒽醌对MCF-7、BEL-7402、SGC-7901三种肿瘤细胞株均表现出中等强度的增殖抑制活性,且抑制率呈明显浓度依赖关系。该化合物对三种肿瘤细胞株的IC50值分别为53.72μM,54.22μM,84.40μM。蒽醌类化合物和环烯醚萜类化合物为白花蛇舌草中含量较高的两类化合物。本文采用HPLC-UV法,建立了白花蛇舌草药材中四种蒽醌类成分的含量测定方法;采用高效液相色谱梯度洗脱方式,二极管阵列检测法,建立了白花蛇舌草药材中对香豆酸和三种环烯醚萜类成分的含量测定方法,并用于不同产地白花蛇舌草中葸醌类和环烯醚萜类化合物的含量测定。本文所建立的方法专属、准确、灵敏,为白花蛇舌草药材的质量控制提供了新的方法。分别选取2-羟基-3-甲基蒽醌和去乙酰基车叶草苷酸作为白花蛇舌草中蒽醌类和环烯醚萜类的代表化合物,对其在大鼠体内的药物动力学过程进行了初步研究。①建立了大鼠血浆中2-羟基-3-甲基蒽醌的HPLC-UV分析方法,以炔雌醇为内标,采用乙腈沉淀蛋白法处理血浆样品,流动相为甲醇-水（78:22,v/v）,检测波长为265 nm。血浆样品中2-羟基-3-甲基蒽醌的浓度在0.10～4.0μg/mL范围内线性关系良好,方法的定量下限为0.10μg/mL,日内精密度RSD≤7.1%,日间精密度RSD≤9.3%,准确度RE%在-5.1～5.4%之间。利用所建立的HPLC-UV法对大鼠腹腔注射给予2-羟基-3-甲基蒽醌的药动学进行了研究。大鼠腹腔注射给予6 mg/kg2-羟基-3-甲基葸醌后的Cmax为2.89μg/mL,药时曲线下面积AUCO-∞为159μg·min·mL-1,表观消除速率常数Ke为0.0164 min-1,消除半衰期T1/2为44.3 min。②建立了大鼠血浆中去乙酰基车叶草苷酸的HPLC-UV分析方法,以鸡屎藤次苷为内标,采用甲醇沉淀蛋白法处理血浆样品,流动相为甲醇-5 mM乙酸铵溶液（3:97,v/v,冰醋酸调节水相pH至3.7）,检测波长为230 nm。血浆样品中去乙酰基车叶草苷酸的浓度在0.20～40μg/mL范围内线性关系良好,方法的定量下限为0.20μg/mL,日内精密度RSD≤6.6%,日间精密度RSD≤10.1%,准确度RE%在-2.5～0.75%之间。利用所建立的HPLC-UV法对大鼠尾静脉注射给予去乙酰基车叶草苷酸的药动学进行了研究。大鼠尾静脉注射给予4.2 mg/kg去乙酰基车叶草苷酸后的Cmax为17.66μg/mL,药时曲线下面积AUCO-∞为619μg·min·mL-1,表观消除速率常数Ke为0.0244min-1,消除半衰期T1/2为28.6 min。本论文综合运用多学科专业知识和多种分析手段,研究了白花蛇舌草药材的化学成分,考察了白花蛇舌草药材提取物和单体化合物在体外对肿瘤细胞的增殖抑制活性,建立了白花蛇舌草药材中葸醌类和环烯醚萜类成分的含量测定方法,初步探讨了2-羟基-3-甲基蒽醌和去乙酰基车叶草苷酸在大鼠体内的药物动力学过程,为白花蛇舌草抗肿瘤药效物质基础的阐明、质量控制方法的研究和药材的进一步开发、利用奠定了基础。

全文目录


摘要  12-14
Abstract  14-17
第一章 前言  17-32
  1.1 抗肿瘤中药的研究现状  17-26
    1.1.1 抗肿瘤中药的分类  17-18
    1.1.2 中药抗肿瘤有效成分的研究概况  18-22
    1.1.3 抗肿瘤中药的实验研究方法  22-23
    1.1.4 中药抗肿瘤作用机制研究进展  23-26
  1.2 白花蛇舌草的研究现状  26-30
    1.2.1 白花蛇舌草的化学成分  26-28
    1.2.2 白花蛇舌草的药理作用  28-30
    1.2.3 白花蛇舌草的质量控制方法研究现状  30
    1.2.4 白花蛇舌草中化学成分药物动力学研究现状  30
  1.3 本研究的立题依据和研究思路  30-32
第二章 白花蛇舌草化学成分的研究  32-47
  2.1 化合物的提取与分离  32-39
    2.1.1 仪器与试药  32-33
    2.1.2 提取与分离  33-39
  2.2 化合物的结构鉴定  39-46
  2.3 小结与讨论  46-47
第三章 HPLC-TOF-MS定性分析白花蛇舌草中的化学成分  47-62
  3.1 仪器与试药  47
  3.2 对照品溶液的制备  47-48
  3.3 供试品溶液的制备  48
  3.4 液相色谱与质谱条件  48
    3.4.1 色谱条件  48
    3.4.2 质谱条件  48
  3.5 结果与讨论  48-61
    3.5.1 四种对照品的质谱裂解信息及裂解途径推测  48-53
    3.5.2 白花蛇舌草药材提取液中化学成分的结构推测  53-61
  3.6 小结与讨论  61-62
第四章 白花蛇舌草总提取物及单体化合物对不同肿瘤细胞的增殖抑制作用研究  62-74
  4.1 实验仪器与材料  62-64
    4.1.1 实验仪器  62-63
    4.1.2 实验材料  63
    4.1.3 肿瘤细胞株  63
    4.1.4 培养基及试液的配制  63-64
  4.2 实验方法  64
    4.2.1 肿瘤细胞的培养  64
    4.2.2 抑制率和IC_(50)值的计算  64
  4.3 实验结果  64-72
    4.3.1 白花蛇舌草总提取物(BH)对三种肿瘤细胞株的增殖抑制作用  64-66
    4.3.2 2,7-二羟基-3-甲基葸醌(BH-3)对三种肿瘤细胞株的增殖抑制作用  66-69
    4.3.3 2-羟基-3-甲基葸醌(BH-1)对三种肿瘤细胞株的增殖抑制作用  69-70
    4.3.4 2-羟基-1-甲氧基-3-甲基葸醌(BH-2)对三种肿瘤细胞株的增殖抑制作用  70-71
    4.3.5 2-羟基-3-甲氧基-7-甲基葸醌(BH-4)对三种肿瘤细胞株的增殖抑制作用  71-72
  4.4 小结与讨论  72-74
第五章 白花蛇舌草药材中有效成分含量测定方法的研究  74-87
  5.1 仪器、试药及药材收集  74-75
    5.1.1 仪器  74
    5.1.2 试药  74-75
    5.1.3 药材收集  75
  5.2 药材中四种蒽醌类成分含量的同时测定  75-80
    5.2.1 溶液的制备  75-76
    5.2.2 色谱条件及系统适用性试验  76-77
    5.2.3 线性关系考察  77
    5.2.4 检测限和定量限  77
    5.2.5 重复性试验  77
    5.2.6 稳定性试验  77-78
    5.2.7 回收率试验  78-79
    5.2.8 样品测定  79
    5.2.9 讨论  79-80
  5.3 药材中对香豆酸和三种环烯醚萜类成分的同时测定  80-86
    5.3.1 溶液的制备  80
    5.3.2 色谱条件及系统适用性试验  80-82
    5.3.3 线性关系考察  82
    5.3.4 检测限和定量限  82
    5.3.5 重复性试验  82
    5.3.6 稳定性试验  82-83
    5.3.7 回收率试验  83
    5.3.8 样品测定  83-84
    5.3.9 讨论  84-86
  5.4 小结  86-87
第六章 白花蛇舌草中两种活性成分在大鼠体内的药动学研究  87-103
  6.1 大鼠血浆样品中2-羟基-3-甲基葸醌分析方法的建立  87-91
    6.1.1 仪器与试剂  87-88
    6.1.2 溶液制备  88
    6.1.3 色谱条件  88-89
    6.1.4 分析方法的验证  89-91
  6.2 腹腔注射给药大鼠体内2-羟基-3-甲基蒽醌的药动学研究  91-95
    6.2.1 药液的制备  91-92
    6.2.2 给药方案及血浆样品采集  92
    6.2.3 大鼠血浆中2-羟基-3-甲基蒽醌的测定  92
    6.2.4 药动学参数的计算  92-94
    6.2.5 讨论  94-95
  6.3 大鼠血浆样品中去乙酰基车叶草苷酸分析方法的建立  95-99
    6.3.1 仪器与试剂  95
    6.3.2 溶液制备  95-96
    6.3.3 色谱条件  96
    6.3.4 分析方法的验证  96-99
  6.4 尾静脉注射给药大鼠体内去乙酰基车叶草苷酸的药动学研究  99-102
    6.4.1 药液的制备  99
    6.4.2 给药方案及血浆样品采集  99
    6.4.3 大鼠血浆中去乙酰基车叶草苷酸的测定  99-100
    6.4.4 药动学参数的计算  100-102
    6.4.5 讨论  102
  6.5 小结  102-103
第七章 结论  103-105
参考文献  105-112
附图  112-127
致谢  127-128
个人简历  128

相似论文

  1. 南海多室草苔虫和脆灯芯柳珊瑚化学成分的研究,R284
  2. 我国烤烟烟叶果胶、纤维素含量分布特点及对评吸品质的影响,S572
  3. 玉米抗倒伏有关性状遗传的初步研究,S513
  4. 河南和云南烤烟碳氮代谢比较研究,S572
  5. 烤烟挥发酸、挥发碱含量分布特点及与品质指标的关系,S572
  6. 烤烟密集烘烤关键工艺条件优化研究,TS44
  7. 不同移栽期的气候生态因素对烤烟品质及成熟烟叶组织结构的影响,S572
  8. 曲靖清香型烤烟风格形成的土壤因素和烟叶品质特点分析,S572
  9. 曲靖烟区气候因素的数量特征及区域划分,S572
  10. 芜菁子化学成分的基础研究,R284
  11. 恩诺沙星缓释制剂的制备及其药物动力学研究,R96
  12. 羽裂莛子藨地上部分的化学成分研究,R284
  13. 小桃儿七的化学成分研究,R284
  14. LC-MS/MS法研究黄体酮乳膏剂在Beagle犬体内的药物动力学,R96
  15. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  16. MTX保守治疗胎盘植入乳汁及血清浓度监测,R714.22
  17. 脂肪干细胞向成牙本质细胞分化的初步研究,R78
  18. 暗紫贝母药用有效成份提取工艺及化学成份的研究,TQ461
  19. 绯红南五味子的化学成分研究,R284
  20. 油茶根化学成分研究,R284
  21. 蛇足石杉化学成分研究,R284

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
© 2012 www.xueweilunwen.com