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树豆叶的HPLC指纹图谱研究
作 者: 李宜融
导 师: 胡英杰
学 校: 广州中医药大学
专 业: 中药学
关键词: 树豆 指纹图谱 树豆蔗H 树豆内酯A 木豆素A 木豆素C 异美五针松双氢黄酮 柚皮素-4’,7-二甲醚 高效液相色谱
分类号: R284
类 型: 博士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
研究背景和目的树豆(Cajanus cajan (L.) Millsp.)是一种食用豆类作物,英文名称"Pigeonpea",我国云南、海南、广东及台湾等地有广泛栽培。作为一种中药,树豆叶具有镇痛、止血、强骨和治疗骨质疏松等作用。其中longistylin A、longistylin C等菧类化合物以及以牡荆苷、异美五针松双氢黄酮等黄酮类成分均具有各种药理活性,包括抗肿瘤、降血脂、抗疟原虫等作用。课题组通过前期实验,从树豆叶中分离得到1ongistylinA、longistylinC、树豆菧H (cajanstilbene H)、树豆内酯A (cajanolactone A)等4个菧类化合物,以及异美五针松双氢黄酮(pinostrobin)和柚皮素4’,7-二甲醚(naringenin-4’,7-dimethyl ether)等2个黄酮成分,其中树豆菧H和树豆内酯A系新化合物。药效试验结果发现,木豆素A、木豆素C、树豆蔗H和树豆内酯A对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460、人前列腺癌细胞株PC-3、人乳腺癌细胞株MCF-7、人宫颈癌细胞株Hela、人结直肠腺癌细胞株HCT-15、人口腔上皮癌耐药细胞株KB-V1等肿瘤细胞均表现出明显的增殖抑制作用。由此看出,菧类化合物是树豆药材的活性成分,值得将其作为药材质量控制的有效成分指标,并纳入质量控制体系。目前,涉及树豆叶质控的指纹图谱的研究甚少:有学者用高效液相色谱法研究了海南产树豆叶的指纹图谱,以包括牡荆苷在内7个共有峰为评价指标,但其余6个共有峰均属未知。但仅仅依靠少数有效成分作为质量标准的指标成分,并不能反映药材质量的全貌。因此,本文结合“重大新药创制”国家科技重大专项课题(编号为2009ZX09103-436),采用HPLC法,对树豆叶药材的脂溶性部位进行指纹图谱研究,以期为树豆叶的开发应用提供理论依据。研究方法本文采用HPLC法,以包括2个新化合物在内的6个化学成分为检测指标,首次对10批树豆叶药材的脂溶性部位进行指纹图谱研究。并使用计算机辅助相似度评价软件进行数据处理,对不同产地的树豆叶药材的脂溶性部位进行相似度分析。研究结果以树豆叶中具有药效活性的化学成分的为基础,包括两个新的蔗类化合物树豆菧H和树豆内酯A,建立了不同产地的树豆叶样品的高效液相色谱指纹图谱,确定9个共有峰构成树豆药材的特征指纹图谱,确认了其中6个特征峰:4号峰为柚皮素4’-7二甲醚,5号峰为异美五针松双氢黄酮,6号峰为longistylin A,7号峰为longistylin C,8号峰为树豆菧H,9号峰为树豆内酯A。结论结果表明所建立的指纹图谱具有好的重现性,且能反映不同产地树豆叶药材的差异性。本文所建立的树豆叶指纹图谱,为树豆叶活性成分的质量控制提供基础方法与数据。
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全文目录
摘要 4-6 Abstract 6-8 目录 8-11 第一章 树豆的研究概况 11-21 1.1 树豆的生物与化学特征 11-21 1.1.1 树豆的起源与分布 11 1.1.2 树豆的生态学特征 11-12 1.1.3 树豆的育种与栽培 12 1.1.4 树豆叶的化学成分 12-16 1.1.5 树豆的药理学研究与临床应用 16-21 第二章 基于HPLC技术的中药材指纹图谱:基本要求与案例 21-31 2.1 样品的收集 22-23 2.2 供试品的制备 23-25 2.2.1 取样 23-24 2.2.2 称样 24 2.2.3 制备 24 2.2.4 定容 24-25 2.2.5 放置 25 2.2.6 标签 25 2.3 参照物的制备 25-26 2.3.1 参照物选择 25 2.3.2 参照物溶液的制备 25-26 2.4 色谱条件的优选 26-27 2.4.1 色谱柱 26 2.4.2 流动相 26-27 2.4.3 检测器 27 2.5 样品测试及方法学考察 27-28 2.5.1 稳定性试验 27-28 2.5.2 精密度试验 28 2.5.3 重现性试验 28 2.6 指纹图谱的建立 28-29 2.7 指纹图谱的分析与评价 29 2.8 高效液相色谱(HPLC)指纹图谱案例 29-31 第三章 基于树豆叶药物活性脂溶性成分的指纹图谱研究 31-49 3.1 材料与方法 32-33 3.1.1 试验样品 32-33 3.1.2 主要仪器设备 33 3.1.3 主要试剂 33 3.2 试验方法 33-36 3.2.1 对照品纯度HPLC分析条件 33-34 3.2.2 树豆叶样品提取方法 34 3.2.3 树豆叶指纹图谱HPLC分析条件 34-35 3.2.4 指纹图谱分析方法学考察 35-36 3.2.5 指纹图谱评价 36 3.3 结果与分析 36-46 3.3.1 对照品菧类化合物纯度HPLC分析结果 36 3.3.2 树豆叶样品提取方法 36-37 3.3.3 指纹图谱HPLC分析条件 37-38 3.3.4 指纹图谱分析方法学考察 38-42 3.3.5 不同产地树豆叶HPLC指纹图谱 42-46 3.4 讨论 46-49 第四章 结论与创新点 49-50 4.1 结论 49 4.2 创新点 49-50 参考文献 50-56 附录 56-63 附录1:树豆叶药材指纹图谱谱图 56-62 附录2:中英文缩略语 62-63 在校期间发表论文情况 63-64 致谢 64
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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