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树豆叶的HPLC指纹图谱研究

作 者: 李宜融
导 师: 胡英杰
学 校: 广州中医药大学
专 业: 中药学
关键词: 树豆 指纹图谱 树豆蔗H 树豆内酯A 木豆素A 木豆素C 异美五针松双氢黄酮 柚皮素-4’,7-二甲醚 高效液相色谱
分类号: R284
类 型: 博士论文
年 份: 2012年
下 载: 178次
引 用: 1次
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内容摘要


研究背景和目的树豆(Cajanus cajan (L.) Millsp.)是一种食用豆类作物,英文名称"Pigeonpea",我国云南、海南、广东及台湾等地有广泛栽培。作为一种中药,树豆叶具有镇痛、止血、强骨和治疗骨质疏松等作用。其中longistylin A、longistylin C等菧类化合物以及以牡荆苷、异美五针松双氢黄酮等黄酮类成分均具有各种药理活性,包括抗肿瘤、降血脂、抗疟原虫等作用。课题组通过前期实验,从树豆叶中分离得到1ongistylinA、longistylinC、树豆菧H (cajanstilbene H)、树豆内酯A (cajanolactone A)等4个菧类化合物,以及异美五针松双氢黄酮(pinostrobin)和柚皮素4’,7-二甲醚(naringenin-4’,7-dimethyl ether)等2个黄酮成分,其中树豆菧H和树豆内酯A系新化合物。药效试验结果发现,木豆素A木豆素C、树豆蔗H和树豆内酯A对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460、人前列腺癌细胞株PC-3、人乳腺癌细胞株MCF-7、人宫颈癌细胞株Hela、人结直肠腺癌细胞株HCT-15、人口腔上皮癌耐药细胞株KB-V1等肿瘤细胞均表现出明显的增殖抑制作用。由此看出,菧类化合物是树豆药材的活性成分,值得将其作为药材质量控制的有效成分指标,并纳入质量控制体系。目前,涉及树豆叶质控的指纹图谱的研究甚少:有学者用高效液相色谱法研究了海南产树豆叶的指纹图谱,以包括牡荆苷在内7个共有峰为评价指标,但其余6个共有峰均属未知。但仅仅依靠少数有效成分作为质量标准的指标成分,并不能反映药材质量的全貌。因此,本文结合“重大新药创制”国家科技重大专项课题(编号为2009ZX09103-436),采用HPLC法,对树豆叶药材的脂溶性部位进行指纹图谱研究,以期为树豆叶的开发应用提供理论依据。研究方法本文采用HPLC法,以包括2个新化合物在内的6个化学成分为检测指标,首次对10批树豆叶药材的脂溶性部位进行指纹图谱研究。并使用计算机辅助相似度评价软件进行数据处理,对不同产地的树豆叶药材的脂溶性部位进行相似度分析。研究结果以树豆叶中具有药效活性的化学成分的为基础,包括两个新的蔗类化合物树豆菧H和树豆内酯A,建立了不同产地的树豆叶样品的高效液相色谱指纹图谱,确定9个共有峰构成树豆药材的特征指纹图谱,确认了其中6个特征峰:4号峰为柚皮素4’-7二甲醚,5号峰为异美五针松双氢黄酮,6号峰为longistylin A,7号峰为longistylin C,8号峰为树豆菧H,9号峰为树豆内酯A。结论结果表明所建立的指纹图谱具有好的重现性,且能反映不同产地树豆叶药材的差异性。本文所建立的树豆叶指纹图谱,为树豆叶活性成分的质量控制提供基础方法与数据。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-11
第一章 树豆的研究概况  11-21
  1.1 树豆的生物与化学特征  11-21
    1.1.1 树豆的起源与分布  11
    1.1.2 树豆的生态学特征  11-12
    1.1.3 树豆的育种与栽培  12
    1.1.4 树豆叶的化学成分  12-16
    1.1.5 树豆的药理学研究与临床应用  16-21
第二章 基于HPLC技术的中药材指纹图谱:基本要求与案例  21-31
  2.1 样品的收集  22-23
  2.2 供试品的制备  23-25
    2.2.1 取样  23-24
    2.2.2 称样  24
    2.2.3 制备  24
    2.2.4 定容  24-25
    2.2.5 放置  25
    2.2.6 标签  25
  2.3 参照物的制备  25-26
    2.3.1 参照物选择  25
    2.3.2 参照物溶液的制备  25-26
  2.4 色谱条件的优选  26-27
    2.4.1 色谱柱  26
    2.4.2 流动相  26-27
    2.4.3 检测器  27
  2.5 样品测试及方法学考察  27-28
    2.5.1 稳定性试验  27-28
    2.5.2 精密度试验  28
    2.5.3 重现性试验  28
  2.6 指纹图谱的建立  28-29
  2.7 指纹图谱的分析与评价  29
  2.8 高效液相色谱(HPLC)指纹图谱案例  29-31
第三章 基于树豆叶药物活性脂溶性成分的指纹图谱研究  31-49
  3.1 材料与方法  32-33
    3.1.1 试验样品  32-33
    3.1.2 主要仪器设备  33
    3.1.3 主要试剂  33
  3.2 试验方法  33-36
    3.2.1 对照品纯度HPLC分析条件  33-34
    3.2.2 树豆叶样品提取方法  34
    3.2.3 树豆叶指纹图谱HPLC分析条件  34-35
    3.2.4 指纹图谱分析方法学考察  35-36
    3.2.5 指纹图谱评价  36
  3.3 结果与分析  36-46
    3.3.1 对照品菧类化合物纯度HPLC分析结果  36
    3.3.2 树豆叶样品提取方法  36-37
    3.3.3 指纹图谱HPLC分析条件  37-38
    3.3.4 指纹图谱分析方法学考察  38-42
    3.3.5 不同产地树豆叶HPLC指纹图谱  42-46
  3.4 讨论  46-49
第四章 结论与创新点  49-50
  4.1 结论  49
  4.2 创新点  49-50
参考文献  50-56
附录  56-63
  附录1:树豆叶药材指纹图谱谱图  56-62
  附录2:中英文缩略语  62-63
在校期间发表论文情况  63-64
致谢  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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