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鸭甲型肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立及华东地区2009-2011年鸭甲型肝炎病毒的流行病学调查

作　者: 朱寅彪
导　师: 彭大新; 陈素娟; 刘秀梵
学　校: 扬州大学
专　业: 兽医
关键词: 鸭甲型肝炎病毒遗传进化分析 VP1 RT-PCR 共感染
分类号: S858.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis,DVH)是危害养鸭业的一种急性高度致死性传染病。病原包括小RNA病毒科禽肝病毒属的鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)(?)星状病毒科禽星状病毒属的鸭星状病毒(Duck astrovirus,DAstV)。 DHAV分为三个型,即1型(DHAV-1)、2型(DHAV-2)和3型(DHAV-3),分别对应以往所称的鸭肝炎病毒血清1型(DHV-1)以及2007年报道的台湾DHV新型和韩国DHV新型。为了解华东地区鸭肝炎病毒的流行情况,本研究建立了检测DHAV的RT-PCR方法,应用该方法检测了从江苏、山东、安徽地区采集疑似感染鸭病毒性肝炎临床样品,并对样品进行病毒分离鉴定、VP1基因遗传进化分析,为鸭病毒性肝炎的防控提供了快速检测方法和指导作用。1.鸭甲型肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立参考GenBank中己发表的DHAV-1和DHAV-3的全基因组序列,利用Primer Premier5.0软件,针对VPl上、下游附近保守区域分别设计两对特异引物,建立了DHAV-1和DHAV-3的RT-PCR检测方法。用该方法对DHAV-1YZ株和DHAV-3JD株进行检测,成功扩增出大小分别为720bp和950bp的目的条带,而与禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌无交义反应,具有较好的特异性；能分别检测出RNA模板含量下限为5.2ng和6.8ng的DHAV-1和DHAV-3,具有较好的敏感性。因此该方法可用于DHAV的快速诊断和分子流行病学调查。2.2009-2011华东地区鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析用该方法对临床疑似鸭肝炎病毒感染的病料进行检测,从15份病料中成功检测到15份DHAV-1和5份DHAV-3,因此,15份病料中有10份为DHAV-1单独感染,占66.7%；5份为DHAV-1和DHAV-3混合感染,占33.3%。病料经处理后通过鸭胚尿囊腔接种,得到15个分离株。以DHAV-1物扩增15株DHAV VP1,并进行序列测定和绘制遗传进化树,结果表明所有毒株均与血清1型的参考毒株处于同一分支上,以DHAV-3引物扩增YN和DHVO12个分离株的VP1,序列测定和绘制遗传进化树,结果表明这2个毒株与韩国DHAV-3及国内分离的DHAV-3(?)司属于一个基因型。用已发表的针对3D基因序列的引物扩增这2个毒株,绘制的遗传进化树与VP1的一致。以鸡胚适应株YZ株制备的鸡抗DHAV-1阳性血清进行鸭胚中和试验,结果显示,抗血清对DHAV-1SY株有较好的中和作用,而对DHAV-1和DHAV-3混合感染的YN株无任何中和作用,说明DHVA-1和DHAV-3存在明显的抗原差异性。综上所述,华东地区的鸭场存在2种血清型的流行株,即DHAV-1和DHAV-3, DHAV-1和DHAV-3的共感染问题进一步加剧了控制该病的困难。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-8
目录  8-9
符号说明  9-10
综述：鸭病毒性肝炎研究进展  10-21
  1 病原学特点及分布  10
  2 生物学特性  10-13
  3 鸭病毒性肝炎流行病学  13-14
  4 DHAV病毒基因组  14-17
  5 鸭肝炎病毒检测方法  17-20
  6 鸭病毒性肝炎的预防治疗  20-21
第一章鸭甲型肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立  21-29
  1 材料和方法  21-24
  2 结果  24-28
  3 讨论  28-29
第二章：2009-2011华东地区鸭甲型肝炎病毒分离鉴定及遗传进化分析  29-46
  1 材料和方法  29-33
  2 结果  33-44
  3 讨论  44-46
参考文献  46-54
致谢  54-55

鸭甲型肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立及华东地区2009-2011年鸭甲型肝炎病毒的流行病学调查

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