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生后发育时期济宁青山羊乳腺中ER、PR和GHR分布及其mRNA表达

作　者: 尹玉涛
导　师: 王树迎
学　校: 山东农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 济宁青山羊乳腺雌激素受体孕激素受体生长激素受体免疫组织化学 RT-PCR
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

济宁青山羊是分布于鲁西南地区的高繁山羊品种，以其性成熟早、繁殖率高、羔皮品质好而著称，母羊初情期始于2月龄，3~4月龄即性成熟，平均产羔率283%（蔡泉，2008）。为探讨ER、PR和GHR在高繁山羊乳腺发育中的表达规律和作用机理，本研究应用SP免疫组化法和RT-PCR方法对生后发育时期济宁青山羊乳腺中ER（ERα、ERβ）、PR和GHR蛋白的分布及其mRNA分子表达规律进行了研究，并对乳腺内的肥大细胞和嗜酸性粒细胞的数量变化和分布进行研究。ER免疫组化结果和RT-PCR结果显示：ERα阳性染色主要见于乳腺组织内的血管内皮细胞、基质细胞和腺管上皮细胞的细胞核中，偶见胞浆阳性着色；ERβ多见胞质和胞核共同着色。自出生至性成熟期，ERα mRNA的表达量呈现逐渐上升趋势，性成熟期最高，极显著高于出生当天和初情期(P<0.01)，180日龄略有下降。ERα平均光密度与其mRNA的相对表达量变化趋势相同；ERβ平均光密度在初情期最低随后维持稳定水平，而其mRNA的相对表达量在初情期最高，之后逐渐下降。PR免疫组化结果和RT-PCR结果显示：PR阳性染色部位与ERα阳性染色结果相似，180日龄在分泌部上皮细胞亦可见PR阳性表达；PR平均光密度自出生至性成熟期呈现逐渐上升的趋势，且性成熟期显著高于出生当天和初情期(P<0.05)，但与180日龄相比无显著差异(P>0.05)。PR mRNA表达量自出生当天到性成熟期较低且组间差异不显著(P>0.05)，180日龄的表达量最高且极显著高于其它的三组(P<0.01)。GHR免疫组化结果和RT-PCR结果显示：GHR阳性染色主要分布于乳腺的血管内皮细胞、基质细胞和腺管上皮细胞且见多为胞质着色，初情期主要分布于基质细胞而腺管上皮细胞中较少，其后可见腺管上皮阳性细胞增多。GHR平均光密度：初情期和性成熟期差异不显著（P>0.05）且极显著高于（P<0.01）出生当天和180日龄，与其mRNA的相对表达量变化趋势相同，且初情期和性成熟期GHR平均光密度和mRNA的相对表达量均比ERα和ERβ的高。生后发育阶段肥大细胞的变化规律：用改良甲苯胺蓝染色法观察乳腺内肥大细胞（MC）的变化规律。结果显示：MTB染色时，肥大细胞胞质染成深蓝紫色。生后当天最少，30日龄猛增，从初情期到性成熟期呈递增趋势，且主要分布于小叶间结缔组织内；150日龄和180日龄下降，肥大细胞多见小叶内结缔组织中围绕乳腺腺管分布，且明显比小叶间肥大细胞小，偶见紫红色肥大细胞分布在小叶间结缔组织中。生后发育阶段嗜酸性粒细胞的瑞氏-吉姆萨染色结果显示：胞质嗜酸性颗粒被染成红色的嗜酸性粒细胞散在分布在乳腺结缔组织中，出生当天很少，30日龄数量最多，随后递减，150到180日龄维持稳定。

全文目录

符号说明  4-8
中文摘要  8-10
Abstract  10-12
1 引言  12-23
  1.1 哺乳动物乳腺的结构与功能  13-14
  1.2 激素对乳腺发育的调控  14-20
    1.2.1 雌激素对乳腺发育的调控  15-16
    1.2.2 雌激素受体的结构和功能及对乳腺发育的调控  16-17
    1.2.3 孕激素对乳腺发育的调控  17
    1.2.4 孕激素受体的结构和功能及对乳腺发育的调控  17-18
    1.2.5 生长激素对乳腺发育的调控  18-19
    1.2.6 生长激素受体的结构和功能及对乳腺发育的调控  19-20
  1.3 实时荧光定量技术及其优点  20
  1.4 乳腺肥大细胞的研究  20-21
  1.5 嗜酸性粒细胞的研究  21-22
  1.6 本研究的目的和意义  22-23
2 材料与方法  23-35
  2.1 实验材料  23-26
    2.1.1 实验动物  23
    2.1.2 实验地点  23
    2.1.3 主要试剂和实验用品  23-26
  2.2 免疫组织化学方法检测乳腺 ERα、ERβ、PR 和 GHR 阳性分布  26-27
    2.2.1 切片标本制备  26
    2.2.2 HE 法染色  26-27
    2.2.3 SP 免疫组织化学方法  27
    2.2.4 对照实验  27
    2.2.5 Image pro-plus 4.5 图像分析  27
  2.3 RT-PCR 检测乳腺 ERαmRNA、ERβmRNA、PR mRNA 和 GHR mRNA 相对表达量  27-34
    2.3.1 总 RNA 的提取  27-28
    2.3.2 RNA 质量的鉴定  28-29
    2.3.3 引物设计及 RT-PCR 扩增  29-34
  2.4 乳腺中肥大细胞甲苯胺蓝染色  34-35
  2.5 乳腺中嗜酸性粒细胞的瑞氏-吉姆萨染色  35
3 结果与分析  35-45
  3.1 生后发育过程中乳腺组织形态学变化  35-36
  3.2 生后发育过程中 ERα、ERβ、PR 和 GHR 阳性细胞在乳腺的分布规律  36-37
    3.2.1 ERα阳性细胞在生后发育不同阶段乳腺内的分布  36
    3.2.2 ERβ阳性细胞在生后发育不同阶段乳腺内的分布  36
    3.2.3 PR 阳性细胞在生后发育不同阶段乳腺内的分布  36
    3.2.4 GHR 阳性细胞在生后发育不同阶段乳腺内的分布  36-37
  3.3 生后发育过程乳腺中 ERαmRNA、ERβmRNA、PRmRNA 和 GHRmRNA 变化规律  37-38
    3.3.1 生后发育过程中 ERαmRNA 变化规律  37
    3.3.2 生后发育过程中 ERβmRNA 变化规律  37
    3.3.3 生后发育过程中 PRmRNA 变化规律  37-38
    3.3.4 生后发育过程中 GHRmRNA 变化规律  38
  3.4 生后发育过程中乳腺肥大细胞变化规律  38-39
    3.4.1 生后发育过程中乳腺肥大细胞形态和数量  38-39
    3.4.2 生后发育阶段乳腺肥大细胞分布  39
  3.5 生后发育阶段乳腺嗜酸性粒细胞的形态、分布和数量  39-40
  3.6 RT-PCR 实验结果  40-45
    3.6.1 总 RNA 及 PCR 产物的电泳检测结果  40-41
    3.6.2 标准曲线及其目的基因的扩增效率  41-42
    3.6.3 扩增曲线结果  42-43
    3.6.4 熔解曲线分析结果  43-45
4 讨论  45-48
  4.1 生后发育过程中乳腺组织的发育变化  45
  4.2 生后发育时期 ERα免疫阳性细胞在乳腺中的分布特点及其 mRNA 表达  45-46
  4.3 生后发育时期 ERβ免疫阳性细胞在乳腺中的分布特点及其 mRNA 表达  46
  4.4 生后发育时期 PR 免疫阳性细胞在乳腺中的分布特点及其 mRNA 表达  46-47
  4.5 生后发育时期 GHR 免疫阳性细胞在乳腺中的分布特点及其 mRNA 表达  47
  4.6 生后发育阶段乳腺肥大细胞的变化规律  47-48
  4.7 嗜酸性粒细胞在乳腺中的变化规律  48
5 结论  48-50
6 参考文献  50-57
7 附图  57-64
致谢  64-65
个人简介及攻读学位期间论文发表情况  65

生后发育时期济宁青山羊乳腺中ER、PR和GHR分布及其mRNA表达

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