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异种胰岛细胞分离及生物活性的实验研究

作 者: 丁利民
导 师: 时军
学 校: 南昌大学
专 业: 外科学
关键词: 异种移植 胶原酶 罗非鱼 中华鳖 胰岛细胞 生物活性
分类号: Q813
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 11次
引 用: 0次
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内容摘要


目的探讨鱼纲(罗非鱼)、爬行纲(中华鳖)动物胰岛细胞分离、提取的方法及功能评价,为临床胰岛移植探索新的供体来源。方法采用胶原酶消化分离罗非鱼、中华鳖胰岛细胞,光镜下观察其形态结构;台盼蓝染色流检测细胞存活率;双硫腙(DTZ)染色,镜下计算分离胰岛的纯度;采用含10%胎牛血清、RPMI 1640培养液等培养胰岛细胞,在体外用不同浓度的葡萄糖刺激胰岛细胞,ELISA法测定其生物学活性。结果分离的罗非鱼、中华鳖胰岛细胞活度均大于90%,分离物中胰岛纯度均大于80%,罗非鱼、中华鳖胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激具有明确的生物学反应,并随着葡萄糖浓度的增加胰岛素的产生也相应增加;二者胰岛细胞在同一时间组对不同浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素具有量效关系(P<0.05),不同时间组间对同一浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素无明显差异(P>0.05)。结论采用胶原酶消化分离罗非鱼、中华鳖胰岛细胞的方法可行,胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素并具有正相关;中华鳖胰岛细胞在相似条件下分泌胰岛素显著高于罗非鱼胰岛细胞,这体现了爬行纲动物胰岛较之鱼纲动物胰岛在生物进化上更高级,其为鱼纲、爬行纲与哺乳纲动物之间的胰岛细胞移植奠定了实验基础。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
英文缩略词表  6-7
第1章 引言  7-9
第2章 材料与方法  9-14
  2.1 研究对象  9
  2.2 主要仪器及试剂  9-11
    2.2.1 主要仪器  9-10
    2.2.2 主要试剂  10
    2.2.3 主要试剂的配制  10-11
  2.3 实验方法  11-14
第3章 结果  14-18
  3.1 罗非鱼中华鳖胰腺大体解剖及形态学观察  14-15
  3.2 分离后罗非鱼、中华鳖胰岛纯度测定  15
  3.3 胰岛细胞活性测定  15
  3.4. 体外胰岛素释放诱导  15-18
第4章 讨论  18-20
第5章 结论与展望  20-21
  5.1 结论  20
  5.2 进一步的研究工作  20-21
致谢  21-22
参考文献  22-24
附图  24-27
攻读学位期间的研究成果  27-50
综述  50-53

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中图分类: > 生物科学 > 生物工程学(生物技术) > 细胞工程
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