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秋茄抗菌、抗胃溃疡活性产物研究

作　者: 符健
导　师: 鲍时翔
学　校: 华南热带农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 秋茄 提取分离 单体 急毒 抗胃溃疡 抗菌作用
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 227次
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内容摘要


生长于热带、亚热带潮间带的红树林,在我国主要分布于海南、广西、广东、福建及香港澳门等地。其不仅具有防海潮、保护海岸、维护生态平衡的功能,在民间还是传统药用植物。因海洋红树植物生长在高湿、高盐和高渗透压的特殊环境,可能含有普通陆地植物所没有的特殊化学成分,故引起学者强大的兴趣,现今已成为海洋药物研究开发的热点之一。鉴于此,对海洋红树植物进行提取分离,筛选出具有药理活性的提取物或者单体化合物,对于红树植物的进一步研究、开发、利用和保护等均具有重要意义。红树林植物-秋茄的根、枝、叶和果,分别经95%乙醇提取,得到浓缩液和残渣,将浓缩液分别减压干燥得到根、枝、叶和果醇提取物,将残渣经水提取得到浓缩液,干燥,分别得到根、枝、叶和果的水提取物。枝水提物经大孔树脂分离,浓缩、干燥得到A、B和C三部位。其中A部位经硅胶柱层析、C-18柱层析、Sephadex LH-20柱层析和薄层层析等技术分离纯化得到单体化合物HS-2,B部位经硅胶柱层析、C-18柱层析和薄层层析等技术分离纯化得到单体化合物HS-4, B部位经硅胶柱层析、C-18柱层析、Sephadex LH-20柱层析和薄层层析等技术分离纯化得到单体化合物HS-5。经核磁共振(1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HMQC、H-H COSY)、质谱(MS)等现代波谱分析技术分析鉴定,HS-2为京尼平甙酸(Geniposidic acid),化学名:Cyclopenta[C]pyran-4-carboxylicacid 1-(β-D-glucopyranosyloxy)-1,4a ,5,7a- tetrahydro- 7- (hydroxymethyl)- (1s,4as,7as) -;HS-4为HS-2衍生物,是一个新的化合物,命名为10-(4’-羟基-3’,5’-二甲氧基苯甲酰基)-京尼平甙酸,英文名:10-(4’-hydroxy-3’,5’-dimethoxybenzoyl)-geniposidic acid;HS-5尚在进行结构鉴定。取秋茄枝水提取物B部位进行小鼠急性毒性试验。结果表明,枝水提取物B部位灌胃给药,小鼠未见明显毒性反应,最大耐受量(maximum tolerable dose,MTD)为4.0g/kg,说明其半数致死量(median lethal dose,LD50)大于4.0g/kg,表明秋茄枝水提取物B部位急性毒性作用较小。利用大鼠幽门结扎型和水浸束缚应激型胃溃疡模型,探讨秋茄枝水提取物B部位抗实验性胃溃疡功能,结果显示秋茄枝水提物B部位能明显减轻幽门结扎型胃溃疡大鼠胃粘膜损伤的程度,高、中、低3个剂量的溃疡抑制百分率分别为模型对照组的55.6%、36.1%、30.6%,其抗溃疡机理可能与降低胃蛋白酶活性和胃液量、提高血清和胃组织中NO含量有关。秋茄枝水提取物B部位能明显减轻应激型胃溃疡大鼠胃粘膜损伤的程度,高、中、低3个剂量的溃疡抑制百分率分别为模型对照组的41.1%、40.4%、25.4%,其抗溃疡作用可能与提高血清和胃组织中SOD活力、降低血清和胃组织中MDA含量有关。对2种胃溃疡模型试验结果表明,秋茄水提物B部位可有效地减轻应激型和幽门结扎型胃溃疡大鼠的胃粘膜损伤。采用常量稀释法分别检测秋茄果、叶、根、枝四个部位的乙醇和水提取物及A、B部位对10种临床常见产酶菌株的体外抗菌作用,用最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)表示各部分的抗菌活性,采用同一方法分别检测从秋茄枝水提物A、B部位分离出的单体化合物HS-2、HS-4和HS-5的体外抗菌活性。结果发现,秋茄根、叶、果和枝的水和乙醇提取物及枝水提取物A、B部位对多数临床分离菌株均显示有体外抑菌和杀菌活性。其中以枝水提取物B部位的体外抗菌活性最强,对10种临床常见产酶菌株的MIC值为1.953mg/ml,最低杀菌浓度试验B部位除对产β-内酰胺酶乙型链球菌的MBC值为15.625mg/ml外,对其他9种临床常见产酶菌株的MBC值均为3.90625mg/ml。3个单体化合物HS-2、HS-4和HS-5对所试产酶革兰阳性菌有明显的抑制作用和一定的杀菌作用,其中HS-2对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和乙型链球菌的MIC值分别为0.5mg/ml、0.125mg/ml和0.25mg/ml,HS-4对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和乙型链球菌的MIC值分别为0.125 mg/ml、0.03125 mg/ml和0.0625mg/ml,HS-5对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和乙型链球菌的MIC值分别为0.25mg/ml、0.125mg/ml和0.25 mg/ml。HS-4对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌MBC值为1mg/ml,HS-5对表皮葡萄球菌MBC值为1mg/ml,提示在所分离的单体化合物中,以HS-4的抗菌活性较强。对所试产酶革兰阴性菌,除HS-2对肠球菌有较弱的抑制作用外,其它单体化合物在所试浓度下未见抗菌作用。

全文目录


中文摘要  3-5
英文摘要  5-12
第一部分 文献综述及立题依据  12-23
  1 红树林植物的分类  12-13
  2 药用红树植物的化学成分研究概况  13-17
    2.1 老鼠簕(Acanthus illicifolius)  13-14
    2.2 海漆(Excoecaria agallocha)  14
    2.3 玉蕊(Barringtonia)  14-15
    2.4 杨叶肖槿(Thespesiapopulnea(L.)soland.ex corr)  15
    2.5 桐花树(Aegiceras comiculatum)  15-16
    2.6 水黄皮(Pongamia pinnata (L.) Merr.)  16
    2.7 角果木(Ceriops tagal)  16
    2.8 秋茄(Kandelia candel)  16-17
    2.9 其它  17
  3 红树植物的药理学研究  17-22
    3.1 抗菌  18-19
    3.2 抗肿瘤  19
    3.3 抗病毒  19-20
    3.4 降血压  20
    3.5 抗高血糖  20
    3.6 抗溃疡  20
    3.7 抗炎、镇痛作用  20-21
    3.8 中枢神经系统作用  21
    3.9 虫鱼毒性(昆虫拒食、杀虫、鱼毒)  21
    3.10 其他  21-22
  4 立题依据  22-23
第二部分 秋茄活性成分提取分离及结构鉴定  23-39
  1 材料与方法  23-28
    1.1 实验材料  23-24
      1.1.1 实验试剂  23
      1.1.2 实验仪器  23-24
      1.1.3 药材  24
    1.2 方法  24-28
      1.2.1 提取  24
      1.2.2 分离  24-28
  2 枝水提物化合物的分离与结构鉴定  28-38
    2.1 枝水提物化合物的分离  28
    2.2 结构鉴定  28-38
      2.2.1 化合物 HS-2 结构鉴定  28-33
      2.2.2 化合物 HS-4 结构鉴定  33-37
      2.2.3 化合物 HS-5 结构鉴定  37-38
  3 讨论  38-39
第三部分 秋茄活性成分抗实验性胃溃疡的研究  39-64
  1 材料与方法  39-48
    1.1 实验材料  39-40
      1.1.1 实验试剂  39
      1.1.2 实验仪器  39-40
      1.1.3 实验动物  40
      1.1.4 受试物  40
    1.2 秋茄枝水提取物 B 部位急性毒性试验  40-41
      1.2.1 实验方法  40-41
    1.3 秋茄枝水提取物 B 部位抗大鼠幽门结扎型胃溃疡作用  41-45
      1.3.1 动物分组  41
      1.3.2 灌胃药液的制备及给药情况  41
      1.3.3 动物模型的制备及标本的采集  41-42
      1.3.4 检测指标及方法  42-45
    1.4 秋茄枝水提取物 B 部位抗大鼠水浸束缚应激型胃溃疡作用  45-47
      1.4.1 动物分组  45
      1.4.2 灌胃药液的制备及给药情况  45
      1.4.3 动物模型的制备及标本的采集  45
      1.4.4 检测指标及方法  45-47
    1.5 数据处理  47-48
  2 结果与分析  48-57
    2.1 秋茄枝水提取物B 部位急性毒性试验结果与分析  48-49
      2.1.1 给药后小鼠急性毒性反应及观察结果  48
      2.1.2 小鼠体重的变化  48-49
      2.1.3 小鼠解剖观察  49
    2.2 秋茄枝水提取物B 部位抗大鼠幽门结扎型胃溃疡作用结果与分析  49-53
      2.2.1 对溃疡指数(UI)的影响  49
      2.2.2 对胃液量的影响  49-50
      2.2.3 对胃液游离酸和总酸度的影响  50-51
      2.2.4 对胃液胃蛋白酶活性的影响  51
      2.2.5 对血清一氧化氮（NO）含量的影响  51-52
      2.2.6 对胃组织一氧化氮（NO）含量的影响  52-53
      2.2.7 对血浆内皮素（ET）含量的影响  53
    2.3 秋茄枝水提取物B 部位抗大鼠水浸束缚应激型胃溃疡作用结果与分析  53-57
      2.3.1 对溃疡指数(UI)的影响  53-54
      2.3.2 对血清超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响  54-55
      2.3.3 对胃组织超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响  55
      2.3.4 对血清丙二醛（MDA）含量的影响  55
      2.3.5 对胃组织丙二醛（MDA）含量的影响  55-57
  3 讨论  57-64
    3.1 秋茄枝水提取物B 部位急性毒性  57
    3.2 秋茄枝水提取物B 部位抗实验性胃溃疡  57-64
      3.2.1 秋茄枝水提取物 B 部位与胃酸和胃蛋白酶  58-59
      3.2.2 秋茄枝水提取物 B 部位与一氧化氮（NO）  59-60
      3.2.3 秋茄枝水提取物 B 部位与内皮素（ET）  60-61
      3.2.4 秋茄枝水提取物 B 部位与超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）..  61-64
第四部分 秋茄活性成分抗菌作用的研究  64-79
  1 材料与方法  64-68
    1.1 实验材料  64-65
      1.1.1 培养基  64
      1.1.2 实验仪器  64
      1.1.3 实验菌株  64
      1.1.4 受试药物  64-65
    1.2 秋茄粗提取物抗菌活性  65-67
      1.2.1 培养基制备  65
      1.2.2 试验菌液的制备  65
      1.2.3 药物液体培养基制备  65-66
      1.2.4 菌株接种及培养  66
      1.2.5 结果观察  66-67
    1.3 秋茄单体化合物抗菌活性  67-68
      1.3.1 培养基制备  67
      1.3.2 试验菌液的制备  67
      1.3.3 药物液体培养基制备  67
      1.3.4 菌株接种及培养  67
      1.3.5 结果观察  67-68
  2 结果与分析  68-76
    2.1 秋茄粗提取物抗菌活性  68-72
    2.2 秋茄单体化合物抗菌活性  72-76
      2.2.1 最低抑菌浓度  72-73
      2.2.2 最低杀菌浓度  73-76
  3 讨论  76-79
    3.1 秋茄粗提物的抗菌活性  76-77
    3.2 秋茄单体化合物的抗菌活性  77-79
第五部分 结论与展望  79-81
  1 结论  79
    1.1 提取与分离  79
    1.2 急性毒性  79
    1.3 抗胃溃疡  79
    1.4 抗菌  79
  2 展望  79-81
参考文献  81-90
附录  90-118
致谢  118

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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