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展示Sap2表位的杂合噬菌体对白色念珠菌感染小鼠的免疫保护作用

作　者: 槐艳艳
导　师: 王丽
学　校: 东北师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 系统性白色念珠菌感染 Sap2 噬菌体展示免疫保护被动免疫治疗
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 21次
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内容摘要

白色念珠菌是一种寄生于正常机体中的机会致病真菌,当机体免疫力低下或者正常菌群失调的情况下,就会转变为致病菌。分泌型天冬氨酸蛋白酶2(Sap2)是白色念珠菌分泌的一种毒性因子。作为一种免疫优势抗原,研究表明,Sap2在动物抵抗白色念珠菌感染的过程中有显著免疫保护作用,并且抗Sap2的抗体对白色念珠菌感染动物的被动治疗也有明显作用。噬菌体作为一种新型多肽载体,在免疫学中有着很重要的作用。本课题组已经把Sap2的两个抗原表位即VKYTS和SLAQVKYTSASS分别展示在了噬菌体上,本实验研究了这两种杂合噬菌体对小鼠在白色念珠菌感染中的免疫保护作用,同时研究了抗这两种杂合噬菌体的抗体对白色念珠菌感染小鼠的被动免疫治疗作用。将Sap2重组蛋白、展示VKYTS的杂合噬菌体、展示SLAQVKYTSASS的杂合噬菌体和野生噬菌体分别通过腹腔免疫BALB/c小鼠,然后从免疫小鼠血清中得到了高效价的抗体,说明噬菌体作为多肽载体在没有佐剂的情况下就可以诱导机体产生强烈免疫应答。免疫四次之后的小鼠以安全浓度(2×106个细胞/只小鼠)的白色念珠菌ATCC10231尾静脉感染,观察肝脏、肾脏中的病理学变化,结果发现分别展示了Sap2的两个表位的杂合噬菌体与重组型Sap2蛋白一样能够对白色念珠菌感染小鼠起到一定的免疫保护作用。感染了白色念珠菌ATCC10231(2×107个细胞/只小鼠)的小鼠用抗血清通过尾静脉给以被动免疫治疗,研究发现,分别展示了Sap2的两个表位的杂合噬菌体抗体与重组型Sap2蛋白抗体一样能够对白色念珠菌感染小鼠起到一定的被动免疫治疗作用。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-14
  一、白色念珠菌感染  8-11
    （一）系统性白色念珠菌感染与体液免疫应答  8-10
    （二）系统性白色念珠菌感染的先天免疫应答与细胞免疫应答  10-11
  二、真菌疫苗  11-12
    （一）全菌疫苗  11
    （二）重组亚单位或者表位疫苗  11-12
  三、噬菌体展示技术  12-13
    （一）噬菌体展示系统  12
    （二）噬菌体载体和噬菌粒载体  12
    （三）噬菌体展示技术特点  12-13
  四、本论文研究内容和意义  13-14
实验材料和方法  14-18
  一、实验材料  14
  二、实验仪器  14
  三、试验方法  14-18
    （一）原核表达的白色念珠菌Sap2 重组蛋白的获取纯化和纯度分析  14-15
    （二）展示白色念珠菌Sap2V 短表位的杂合噬菌体和V 长表位的杂合噬菌体的制备和纯度分析  15
    （三） Sap2 重组蛋白、展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2 V 长表位的杂合噬菌体抗原性分析  15-16
    （四） Sap2 重组蛋白、展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2V 长表位的杂合噬菌体对小鼠系统性念珠菌感染的保护作用  16-17
    （五）抗Sap2 重组蛋白、展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2V 长表位的杂合噬菌体的抗体对感染系统性念珠菌的小鼠的被动免疫治疗  17-18
实验结果与分析  18-27
  一、Sap2 重组蛋白和杂合噬菌体的SDS-PAGE 分析  18-19
    （一） Sap2 重组蛋白的SDS-PAGE 电泳分析  18
    （二）展示 Sap2V 短表位的杂合噬菌体和展示 Sap2V 长表位的杂合噬菌体SDS-PAGE 电泳分析  18-19
  二、Sap2 重组蛋白、展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2V 长表位的杂合噬菌体抗原性分析  19-22
    （一）抗Sap2 重组蛋白、展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2V 长表位的杂合噬菌体以及野生噬菌体纯化多抗的免疫原性分析  19-20
    （二） Sap2 重组蛋白特异反应性分析  20-21
    （三）展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2V 长表位的杂合噬菌体特异反应性分析  21-22
  三、Sap2 重组蛋白、展示Sap2V 短表位的杂合噬菌体和展示Sap2 表位V 长的杂合噬菌体对小鼠系统性念珠菌感染的保护作用  22-26
  四、抗展示Sap2 表位V 短的杂合噬菌体的多克隆抗体和抗展示Sap2 表位V 长的杂合噬菌体的多克隆抗体对白色念珠菌感染小鼠的被动治疗作用  26-27
讨论  27-30
  一、噬菌体在没有佐剂的情况下就可以诱导机体产生抗体  27
  二、展示抗原表位的杂合噬菌体在白色念珠菌感染中的免疫应答  27-28
  三、展示Sap2 V 短表位的杂合噬菌和展示Sap2 V 长表位的杂合噬菌体作用差别不显著  28
  四、噬菌体疫苗  28-29
  五、小结  29-30
参考文献  30-35
致谢  35-36
在校期间发表论文情况  36-37
在校期间参加科研项目情况  37

展示Sap2表位的杂合噬菌体对白色念珠菌感染小鼠的免疫保护作用

内容摘要

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