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人AFP免疫小鼠全套单链抗体基因文库的构建筛选及其基因序列分析和表达的研究

作　者: 邓健蓓
导　师: 苏成芝
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学
关键词: 甲胎蛋白抗体可变区基因噬菌体表面呈现基因文库聚合酶链反应核苷酸序列
分类号: Q78
类　型: 博士论文
年　份: 1995年
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内容摘要

甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)是肝细胞癌的特征性蛋白，在临床诊断和治疗方面一直受到广泛的重视。AFP在体内可运载不饱和脂肪酸至肝癌细胞吸收利用，并可抑制T淋巴细胞增殖而保护肿瘤细胞逃脱免疫监视，对维持肿瘤细胞生长增殖起着一定的作用，在分泌释放之前可停留在肝癌细胞表面，成为肝癌细胞的重要标志物，这一特性是利用抗AFP抗体进行肿瘤显像诊断和导向治疗的物质基础，近年来，已有不少鼠源性抗AFP单克隆抗体及抗体分子片段在这些方面应用的报道。鼠源性单克隆抗体由于具有较强的免疫原性，其实际应用价值受到了很大的影响，经基因工程改造的各种新型抗体，尤其是单链抗体和在此基础上构建的双功能抗体，能够克服单克隆抗体的主要缺点，因而具有很好的应用前景。目前，抗AFP基因工程抗体的研究还比较少，1992年Hong等曾从一株分泌鼠抗人

全文目录

英文缩写词表  5-8
中文摘要  8-12
英文摘要  12-16
前言  16-18
文献回顾  18-46
  一、基因工程抗体的研究  18-43
    (一) 几种基因工程抗体的研究进展  20-31
    (二) 全套抗体库克隆技术或全套抗体噬菌体表面呈现技术的研究  31-43
  二、抗AFP基因工程抗体的研究  43-46
材料与方法  46-57
  一、主要实验材料  46-50
  二、主要实验方法  50-57
实验结果  57-85
  一、人AFP免疫小鼠全套抗体(ScFv)基因噬菌体表面呈现文库的构建与筛选  57-62
    (一) 人AFP免疫小鼠全套V_H和V_L基因片段的扩增和鉴定  57-58
    (二) 全套ScFv基因的拼接和PCR扩增  58-59
    (三) 全套ScFv基因的克隆和文库的构建  59
    (四) ScFv重组噬菌体的表达和panning筛选富集  59-60
    (五) ELISA法检测单个噬菌体克隆的AFP结合活性  60-62
  二、两个抗AFP ScFv基因的序列测定和分析  62-75
    (一) F3、B10噬菌粒中ScFv基因的核苷酸序列测定  62-66
    (二) VHF3基因序列的计算机分析  66-69
    (三) VLF3基因序列的计算机分析  69-72
    (四) VLB10基因序列的计算机分析  72-75
  三、两种不同的抗AFP ScFv基因在大肠杆菌中的表达和活性检测  75-85
    (一) pF3和pB10噬菌粒的限制性内切酶图谱  75-76
    (二) pFB噬菌粒的构建  76-78
    (三) ScFv-F3和ScFv-FB在噬菌体表面的呈现表达和活性检测  78-80
    (四) 可溶性ScFv-F3和ScFv-FB在E coliHB2151中的表达和活性检测  80-85
讨论  85-95
  一、全套抗体噬菌体表面呈现技术的某些重要环节  85-89
  二、利用噬菌体表面呈现技术筛选抗AFP抗体的V区基因和单链抗体片段  89-95
小结  95-96
致谢  96-97
参考文献  97-110

人AFP免疫小鼠全套单链抗体基因文库的构建筛选及其基因序列分析和表达的研究

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