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大连市流感病毒血凝素基因遗传特性研究

作　者: 侯君
导　师: 黄敏
学　校: 大连医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 流感血凝素基因核苷酸序列
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:了解2005～2009年大连市流感流行情况;对分离流感病毒株血凝素(HA)基因进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推导,与最近流行代表株进行比较,及时发现流感病毒新变异株,为疫苗株选择等流感防治工作提供科学依据。方法:收集大连市流感监测哨点医院门诊就诊病例和流感样病例(ILI,influenza-likeillness),将来自监测哨点医院的流感样病例咽拭子标本用狗肾传代细胞(MDCK)培养和分离流感病毒,用红细胞和流感病毒标准参考血清进行鉴定分型。提取病毒RNA,利用RT-PCR方法扩增出HA基因片断,对扩增产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件与流行株代表株、疫苗株进行序列比较,分析其核苷酸序列和氨基酸序列的同源性及变异情况,以及变异对流感病毒抗原性改变的意义。结果:1、在2005年0l月～2009年3月共采集流感样病例1291份咽拭子标本,经MDCK细胞分离出流感病毒87株,其中H1N1亚型流感病毒39株,占分离毒株的44.83%;H2N3亚型流感病毒16株,占分离毒株的18.39%;乙型流感病毒32株,占分离毒株的36.78%。2、H1N1亚型流感病毒HA1基因分析结果表明:05～09年大连市分离到的H1N1亚流感病毒的核苷酸同源性为:97.3%～99.9%。05～06年分离株与2004～2007年国际疫苗株A/ New caledonia/ 20/ 1999 (H1N1)相比较,核苷酸同源性为98.6%～99.2%;2007年分离株与2007～2008年流感疫苗株A/ Solomon Islands/ 3/2006相比较,核苷酸同源性为95.8%～97.3%;08～09年分离株与08～09年疫苗代表株A/ Brisbane/59/ 2007 (H1N1)相比较,核苷酸同源性为96.9%～99.5%。与本年度的疫苗株相比,2005、2006、2007和2008年分离株的HA1区分别发生了11个、9个、15、15个突变。3、H2N3亚型流感病毒HA1基因分析结果表明:H3N2亚型流感病毒株与同时期的H3N2亚型流感疫苗株A/ Fujian/411/2002、A/ Wisconsin/ 67/ 2005相比其抗原性变异不大,核苷酸同源性为98.00%～99.10% ,氨基酸同源性为97.40%～98.20%。2005年和2007年分离株与本年疫苗株比较分别有6个、14个氨基酸位点发生了替换,分别包含一个抗原决定簇197(S >N)和194 (V >G)。4、乙型流感病毒HA1基因分析结果表明:2007～2008年大连市流行乙型Yamagata系流感毒株。与疫苗标准株B/Shanghai/361/02相比,核苷酸同源性为97.3～97.8%,有8个氨基酸位点发生改变,在196位增加了一个糖基化位点。5、基于对2005年至2009年的63株流感病毒HA基因测序及分析的基础上,对大连市流感病毒的流行强度进行了预测,预测结果与实际情况基本相符。结论:1、2008～2009大连市流行的H1N1亚型流感毒株与WHO推荐的疫苗株A/wisconsin/67/05相比已经发生一定变化;不同时间及地区流行的流感毒株也有差异。2、大连市05、07年流行的H2N3亚型流感病毒,与前几年流行的H2N3亚型流感病毒相比已发生变异,05、07年疫苗代表株A/ Fujian/411/ 2002、A/ Wisconsin/ 67/ 2005对大连市流行的H3亚型病毒有较好的预防作用。3、2007～2008大连市流行的乙型Yamagata系病毒与B/Shanghai/361/02相比已经发生变化。4、通过五年的实践证明对流感病毒的HA基因变异情况的监测,可以确定流感年度流行株、及早发现变异株,及时地从分子水平评估国际疫苗推荐株对大连市普通人群的保护效果,为流感疫情预测和预警提供重要依据。

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摘要 6-8Abstract 8-10前言 10-11材料和方法 11-15 1.1 实验材料 11-12 1.2 实验方法 12-15结果 15-23 2.1 流感病毒分离结果 15-16 2.2 流感病毒 HA 基因 RT-RCR 扩增结果 16-17 2.3 流感病毒 HA 基因测序与生物信息学分析结果 17-23讨论 23-26结论 26-27参考文献 27-30综述 30-41 参考文献 37-41致谢 41

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