学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

外周神经损伤后大鼠背根节中基因的克隆和表达

作　者: 肖华胜
导　师: 陈苏民；张旭
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 神经肽受体背根节脊髓慢性痛 cDNA文库差减杂交差异筛库基因克隆表达
分类号: R346
类　型: 博士论文
年　份: 1999年
下　载: 45次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

外周神经损伤后大鼠背根节中许多基因的表达发生了明显改变，以往主要采用原位杂交和免疫组织化学方法研究从正常组织中克隆的基因的表达改变，虽然发现了一些表达增加的物质，如甘丙肽、神经肽Y和神经肽Y的受体等神经肽和受体，以及一氧化氮合酶等，但是已有的研究结果还不能充分解释外周神经损伤后病理现象的分子和细胞机制，特别是慢性痛机制。本研究应用多种差异表达基因克隆技术，克隆在外周神经损伤后背根节中差异表达的基因。首先，针对电生理实验提示的外周神经损伤后背根节中可能存在至少一种高表达的神经降压肽受体，最近神经降压肽受体2型被克隆，我们用原位杂交技术研究了神经降压肽受体2型在背根节中的分布和外周神经损伤后对它表达的影响。发现神经降压肽受体2型主要在大细胞中表达，有11％的神经元含神经降压肽受体2型mRNA，损伤后含这种神经降压肽受体mRNA的背根节神经元数目明显减少。神经降压肽受体2型同背根节小神经元中的神经降压肽受体1型一样仍然是表达降低的受体。该结果再次提示用组织化学研究方法已难以深入了解外周神经损伤后背根节中高表达的信息分子。第二，我们探讨了联合应用差异表达基因克隆技术来进行研究，这些技术包括差异显示PCR(DD-PCR)、构建cDNA文库、差异筛库和差减杂交。应用DD-PCR技术和针对G蛋白偶联受体的第Ⅵ跨膜区段的四条简并引物，克隆了外周神经损伤后在背根节中高表达的

全文目录

英文缩写词及常用符号表  5-8
博士论文摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
论文正文  13
一、前言  13-16
二、文献回顾  16-49
  (一) 外周神经损伤后背根节中基因表达变化及意义  16-37
  (二) 克隆差异表达基因的主要技术  37-49
三、材料与方法  49-70
  (一) 动物模型和取材  49
  (二) 实验方法  49-70
    1．原位杂交  49-51
    2．RNA的提取和mRNA的纯化  51-52
    3．RNA变性甲醛凝胶电泳  52-53
    4．差异显示PCR  53-57
    5．正常组和损伤组背根节经典cDNA文库的构建  57-61
    6．脊髓差减文库的构建  61-67
    7．差异筛库  67-68
    8．DNA序列测定  68-69
    9．序列的同源性比较  69-70
四、结果  70-96
  (一) 神经降压肽受体2型在背根节中的分布及外周神经损伤对其表达的影响  70
  (二) 总RNA和mRNA的提取和纯化  70-73
  (二) mRNA差异显示方法的建立和外周神经损伤后差异表达基因片段的克隆  73-77
  (四) 正常组和损伤组背根节经典cDNA文库的构建  77-88
  (五) 用差异筛库方法克隆差异表达基因  88
  (六) 脊髓差减文库的构建和筛选  88-96
五、讨论  96-105
  (一) 常用的研究外周神经损伤后基因表达的方法  96-98
  (二) 克隆差异表达基因方法的特点  98-101
  (三) cDNA文库的初步分析及代表性  101-102
  (四) 部分差异基因的克隆、表达和意义  102-105
六、结论  105-107
七、致谢  107-108
八、参考文献  108-135
九、博士在读期间已发表和待发表的论文  135-136

外周神经损伤后大鼠背根节中基因的克隆和表达

内容摘要

全文目录

相似论文