学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

组织工程化尿道的实验研究

作　者: 翟弘峰
导　师: 李森恺；史弘道
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 整形外科
关键词: 上皮细胞壳聚糖组织工程博士研究生尿道口医科大学复合材料毕业论文成纤维细胞新西兰幼兔
分类号: R318.0
类　型: 博士论文
年　份: 2001年
下　载: 74次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

对于尿道缺损、后尿道狭窄，临床上常以皮肤(粘膜)游离移植或局部带蒂皮瓣转移修复，但皮肤(粘膜)游离移植常因挛缩导致尿道狭窄，尿瘘发生率亦较高；局部带蒂皮瓣转移则常致局部臃肿，形态不佳，患者及家属难以接受。况且，自体组织移植是以牺牲正常组织为代价的“以手术创伤修复组织缺损”的治疗模式，既增加了新的手术创伤，又增加了手术并发症的机率，且自体组织来源有限，限制了其临床应用。随着生命科学、材料科学以及相关物理、化学学科的发展，人们提出了一个新的概念——组织工程。它是应用细胞生物学和工程学的原理，研究和开发能修复损伤组织和改善其功能的具有活性的生物替代物的一门科学。虽然组织工程概念的提出只有十几年的时间，但它已得到了异常迅猛的发展，在许多方面已取得重大突破。组织工程为整形外科医生解决临床问题提供了全新的思维模式。本实验研究、探讨哺乳类动物尿道粘膜上皮细胞的体外培养技术和方法，从仿生学角度出发，探索、制备可生物降解的胶原—壳聚糖复合材料支架，进而采用组织工程技术构建尿道。实验中发现，以中性蛋白酶与胰蛋白酶联合消化尿道粘膜是比较理想的分离尿道粘膜上皮细胞的方法，并摸索出了获取细胞数量最多时的胰酶消化时间。采用此方法，成功地分离了新西兰幼兔、近交系Luis大鼠的尿道粘膜上皮细胞。在国内首次报道了哺乳类动物尿道粘膜上皮细胞的体外培养技术和方法。分别采用以胶原为底物、以L-929细胞为滋养层、以胶原为底物同时以L-929细胞为滋养层的培养技术，在体外成功地培养了尿道粘膜上皮细胞，并进行了传代、冻存及复苏。对培养的尿道粘膜上皮细胞进行了HE染色、Giemsa染色、Feulgen染色、免疫组化染色，以透射电镜观察细胞超微结构，对培养的尿道粘膜上皮细胞进行了鉴定，并以流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成情况。整个上皮细胞生长期间无成纤维细胞混杂生长，均为单一的二倍体上皮细胞。细胞可传11～13代，成活50～60天。第9代前的细胞形态良好，与原代无明显区别。细胞间富含桥粒等上皮细胞的典型结构，且没有出现永生化及恶性变。据此，可以认为我们所培养的角化细胞具有干细胞的部

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
第一部分文献综述  11-39
  1.组织培养的发展  11-12
  2.组织工程学研究进展  12-15
  3.生物可降解材料的研究  15-22
  4.生长因子  22-24
  5.种子细胞的研究  24-28
  6.临床再造尿道方法回顾  28-34
  7.综述小结  34-35
  8.参考文献  35-39
第二部分尿道粘膜上皮细胞的分离、纯化、体外培养和鉴定  39-69
  1.材料与设备  39-41
    1.1 试剂  39-40
    1.2 溶液配制  40
    1.3 设备  40-41
  2.方法  41-46
    2.1 培养板预铺胶原  41-42
    2.2 L929细胞预处理  42
    2.3 尿道粘膜上皮细胞的分离  42-43
    2.4 细胞的纯化  43-44
    2.5 尿道粘膜上皮细胞的原代培养  44
    2.6 尿道粘膜上皮细胞的传代培养  44-45
    2.7 尿道粘膜上皮细胞的冻存与复苏  45-46
    2.8 尿道粘膜上皮细胞生物学性状检测  46
  3.结果与讨论  46-66
    3.1 尿道粘膜上皮细胞的分离  46-48
    3.2 尿道粘膜上皮细胞的纯化  48
    3.3 尿道粘膜上皮细胞的培养  48-54
    3.4 尿道粘膜上皮细胞增殖动力学  54-57
    3.5 培养的尿道粘膜上皮细胞的动态变化  57-58
    3.6 尿道粘膜上皮细胞的冻存与复苏  58
    3.7 尿道粘膜上皮细胞生物学性状检测  58-66
  4.本章小结  66-67
  5.参考文献  67-69
第三部分仿生细胞支架制备  69-83
  1.生物降解支架材料  69-73
    1.1 胶原  69-72
    1.2 壳聚糖  72-73
  2.材料与设备  73-74
  3.方法  74-77
    3.1 材料制备  74-76
    3.2 复合材料性状及理化性能  76
    3.3 生物学性能检测  76-77
  4.结果  77-79
    4.1 性状  77
    4.2 超微结构与孔径  77-78
    4.3 pH结果  78
    4.4 急性全身毒性试验  78
    4.5 皮内刺激试验  78-79
    4.6 皮肤致敏试验  79
    4.7 溶血试验  79
    4.8 细胞毒性试验  79
    4.9 致突变试验  79
  5.讨论  79-81
  6.本章小结  81-82
  7.参考文献  82-83
第四部分组织工程化尿道的实验研究  83-108
  1.材料与设备  83-85
    1.1 试剂  83-84
    1.2 溶液配制  84
    1.3 设备  84-85
    1.4 实验动物  85
  2.方法  85-90
    2.1 原代尿道粘膜上皮细胞的获取  85-86
    2.2 制备组织工程化尿道  86
    2.3 HE染色  86
    2.4 CFDA-AM荧光染色  86-87
    2.5 超微结构观察  87
    2.6 激光共焦细胞仪检测  87-89
    2.7 组织工程化尿道动物体内实验  89-90
  3.结果与讨论  90-106
    3.1 相差显微镜观察  90-92
    3.2 HE染色  92-94
    3.3 荧光染色  94-95
    3.4 超微结构  95-97
    3.5 体内标本病理检查  97-101
    3.6 激光共焦细胞仪检测  101-106
  4.本章小结  106-107
  5.参考文献  107-108
全文总结  108-111
博士期间发表的论文与论著  111-112
致谢  112

组织工程化尿道的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文