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3，4-二羟基肉桂酸钠和表没食子儿茶素没食子酸酯的抗肿瘤生化调节作用

作　者: 徐峰
导　师: 甄永苏
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 肿瘤细胞增殖博士论文合并用药层粘连蛋白血管生成抑制作用药物合用细胞外基质纤粘连蛋白化疗药物
分类号: R730.5
类　型: 博士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

3，4-二羟基肉桂酸钠和表没食子儿茶素没食子酸酯的抗肿瘤生化调节作用天然来源的3，4-二羟基肉桂酸是具有肉桂酸分子结构的化合物，在咖啡、水果、蔬菜、谷物中含量丰富，文献报道食用富含3，4-二羟基肉桂酸的天然食品对癌症具有化学预防作用。但迄今未见3，4-二羟基肉桂酸体内体外抗肿瘤作用的报道。3，4-二羟基肉桂酸溶解性差，我们将其制成水溶性良好的钠盐。本论文第一、二、三部分研究3，4-二羟基肉桂酸钠（DCA-Na）的抗肿瘤生化调节作用。茶是深受人们喜爱的饮品之一。多项流行病学研究结果提示绿茶可预防癌症。本研究室既往工作发现绿茶提取物增强阿糖胞苷、氨甲蝶呤抗代谢物对肿瘤细胞的杀伤作用。本论文第四部分探讨绿茶提取物中主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的抗肿瘤生化调节作用。一、3，4-二羟基肉桂酸钠抗肿瘤作用核苷转运抑制实验表明DCA-Na可抑制人肝癌BEL-7402细胞的核苷转运，但抑制作用中等，IC₅₀约为1000μg／ml。MTT法研究结果表明，DCA-Na对人白血病HL-60细胞、人口腔鳞癌KB细胞及BEL-7402细胞的增殖具有抑制作用，其IC₅₀为100-200μg／ml，对KB细胞、BEL-7402克隆形成具有抑制作用，其IC₅₀为0.5-3μg／ml，具有时效关系和量效关系。体内实验证实DCA-Na可抑制小鼠移植性肿瘤（小鼠肝癌22，结肠癌26）的生长，1g／kg剂量下抑瘤率为41％-55％，且无明显毒性。DCA-Na对小鼠移植性肿瘤Lewis癌的肺转移亦具有抑制作用，1g／kg剂量下抑制率为55％。流式细胞仪结果发现DCA-Na单独作用BEL-7402细胞24h后，细胞阻滞在S期，G₂／M期细胞减少，G₁期细胞几无改变。DCA-Na可诱导BEL-7402细胞凋亡。Western blot检测蛋白发现以10μg／ml、25μg／ml的DCA-Na作用BEL-7402细胞48h后，细胞活化的caspase-3和bax蛋白表达依次增强，对细胞bcl-2蛋白表达依次减弱。DCA-Na作用BEL-7402细胞24h后，细胞胞内Ca²⁺含量有一定的增加，对线粒体膜电位略有降低。以上结果表明：DCA-Na可诱导肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的增殖、抑制移植性肿瘤的生长和转移，是一个具有中度活性的抗肿瘤化合物。

全文目录

缩略词表中英对照  7-8
博士论文摘要  8-12
Abstract of Doctorate Dissertation  12-17
第一部分 3,4-二羟基肉桂酸钠抗肿瘤作用  17-30
  前言  17
  实验材料  17-18
  实验方法  18-21
  结果  21-26
    一、DCA-Na对肿瘤细胞核苷转运的抑制  21
    二、DCA-Na对肿瘤细胞增殖的抑制作用  21-22
    三、DCA-Na对肿瘤细胞克隆形成的影响  22
    四、DCA-Na抑制细胞增殖作用的时效关系和量效关系  22-23
    五、DCA-Na对小鼠移植性肿瘤生长的抑制作用  23
    六、DCA-Na对小鼠Lewis癌肺转移的抑制作用  23-24
    七、DCA-Na对肝癌BEL-7402细胞周期的影响  24
    八、DCA-Na诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡  24-25
    九、DCA-Na对肝癌BEL-7402细胞caspase-3、bax、bcl-2蛋白的影响  25-26
    十、DCA-Na对肿瘤细胞胞内Ca~(2+)含量、线粒体膜电位(△ψm)的影响  26
  讨论  26-27
  参考文献  27-30
第二部分 3,4-二羟基肉桂酸钠抑制肿瘤血管生成和侵袭及机制  30-47
  前言  30
  实验材料  30-31
  实验方法  31-35
  结果  35-44
    一、DCA-Na对人内皮细胞ECV304增殖的抑制  35-36
    二、DCA-Na诱导人内皮细胞ECV304细胞凋亡：生化改变  36-37
    三、DCA-Na对人内皮细胞ECV304细胞周期的影响及细胞凋亡率  37-38
    四、DCA-Na诱导人内皮细胞ECV304细胞凋亡：形态观察  38-39
    五、DCA-Na对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制  39-40
    六、DCA-Na肿瘤细胞粘附基底膜的抑制  40
    七、DCA-Na对肿瘤细胞侵袭能力的抑制  40-41
    八、DCA-Na对肿瘤细胞分泌明胶酶的抑制  41-42
    九、DCA-Na对肿瘤细胞明胶酶活性的抑制  42
    十、DCA-Na对Ⅳ型胶原酶活性的抑制  42-43
    十一、DCA-Na对肿瘤细胞VEGF基因表达的影响  43
    十二、DCA-Na对肿瘤细胞VEGF蛋白表达的影响  43-44
  讨论  44-45
  参考文献  45-47
第三部分 3,4-二羟基肉桂酸钠与化疗药物的抗肿瘤协同作用  47-62
  前言  47
  实验材料  47-48
  实验方法  48-51
  结果  51-59
    一、DCA-Na与化疗药物抗肿瘤协同作用  51-53
    二、DCA-Na与MMC序贯给药对肿瘤细胞增殖抑制的比较研究  53-55
    三、DCA-Na与化疗药物对小鼠移植性肿瘤生长抑制的协同作用  55-56
    四、DCA-Na与MMC合用对BEL-7402细胞Bcl-2、bax、caspase-3蛋白表达的影响  56-58
    五、MMC及与DCA-Na合用对肿瘤细胞周期的影响  58
    六、MMC及与DCA-Na合用对肿瘤细胞胞内Ca~(2+)含量、线粒体膜电位(△ψm)的影响  58-59
  讨论  59-60
  参考文献  60-62
第四部分表没食子儿茶素没食子酸酯与化疗药物的抗肿瘤协同作用  62-82
  前言  62
  实验材料  62-63
  实验方法  63-68
  结果  68-78
    一、EGCG对肿瘤细胞核苷转运的抑制作用  68
    二、EGCG对肿瘤细胞增殖和克隆形成的抑制作用  68
    三、EGCG与化疗药物对肿瘤细胞增殖抑制的协同作用：生长曲线法  68-69
    四、EGCG与化疗药物对肿瘤细胞增殖抑制的协同作用  69-71
    五、EGCG抵消外源核苷的救援作用  71-72
    六、EGCG增强化疗药物对肿瘤细胞DNA合成的抑制  72-73
    七、EGCG及与化疗药物合用对肿瘤细胞周期的影响  73-75
    八、EGCG与化疗药物合用对肿瘤细胞DNA片段化的影响  75-76
    九、EGCG与化疗药物合用对肿瘤细胞胞内Ca~(2+)的影响  76
    十、EGCG与化疗药物合用对肿瘤细胞DNA损伤的影响  76
    十一、EGCG与化疗药物合用对肿瘤细胞凋亡的形态学观察  76-78
    十二、EGCG与化疗药物合用对肿瘤细胞bcl-2表达的影响  78
  讨论  78-80
  参考文献  80-82
研究论文结论  82-83
综述  83-110
致谢  110

3，4-二羟基肉桂酸钠和表没食子儿茶素没食子酸酯的抗肿瘤生化调节作用

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