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尖锐湿疣病变的人乳头瘤病毒分子流行病学研究及L1序列多态性分析和在原核表达体系中的表达

作　者: 洪少林
导　师: 王家璧；曾毅
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 皮肤性病学
关键词: 人乳头瘤病毒 博士论文 医科大学 协和医院 表达体系 分子流行病学研究 氨基酸序列 碱基替换 多态性分析 抗原性
分类号: R752.53
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
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内容摘要


从临床尖锐湿疣(condyloma acuminata，CA)的人乳头瘤病毒(human papillomavims，HPV)感染的分子流行病学研究入手，并对L1晚期基因进行克隆和序列分析，以跟踪HPV感染的传播途径，分析HPV感染的表型和基因型之间的关系，并筛选有代表性的分离株进行重组疫苗的构建，表达和免疫学分析。 本文采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)方法从尖锐湿疣患者皮损中检测人乳头瘤病毒，设计通用引物MY09／MY11，扩增HPV晚期基因L1区的一段保守序列，并通过限制性片断长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism，RFLP)分型。对于难以通过酶切鉴定的PCR产物，构建重组测序质粒，检索GenBank进一步分型鉴定。结果发现正常患者HPV6型为主要感染型别，其次是HPV11型。HPV6型患者年龄较HPV11和HPV6+HPV11型更低；而高龄患者和免疫抑制患者则以HPV11+HPV6的混合感染和HPV11的感染为主。部分患者还检出HPV16型与其他型的混合感染，均发生于女性患者，而一般存在于正常生殖道组织的HPV53个别也可导致尖锐湿疣的发生。 根据不同临床特征选择主要致病型HPV6型八个分离株，扩增L1晚期基因，构建重组测序质粒pMD18-T-L1，双脱氧法测序并分析L1区的核苷酸和氨基酸序列变异状况。结果表明HPV6L1基因序列发生碱基替换的区域主要有四个区，包括SR1(5911～6104)，SR2(6217～6273)，SR3(6540～6661)和SR4(7062～7250)。少数的碱基替换导致错义突变，推导的蛋白质一级结构中有0～3个氨基酸发生变异，但抗原性强弱与原型HPV6基本一致。通过比较，在我院检测的标本HPV6 L1区的基因变异位点与在日本检测的标本有较多的一致，而与欧美地区的标本相比变化较多，这说明HPV6 L1区的亲缘性可能与地理位置的远近有关。而对L1序列的抗原指数、氨基酸表面特征和亲水性特征进行分析预测，发现各HPV6变异株间并无明显的差异，提示HPV6 L1区是该病毒系统发生过程中非常保守的区域，可进一步构建表达载体，表达目的蛋白并比较氨基酸序

全文目录


英文缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
第一部分 尖锐湿疣病变的人乳头瘤病毒的分子流行病学研究和人乳头瘤病毒6型Ll序列多态性分析  13-48
  (一) 实验材料  14-17
  (二) 实验方法  17-27
  (三) 结果  27-41
  (四) 讨论  41-48
第二部分 HPV6型L1蛋白在原核表达体系中的表达和免疫原性分析  48-67
  (一) 实验材料  49-52
  (二) 实验方法  52-58
  (三) 结果  58-62
  (四) 讨论  62-67
小结  67-68
参考文献  68-74
综述：低危型人乳头瘤病毒疫苗研究进展  74-110
  (一) HPV病毒：结构,分类和致病作用  75-78
  (二) HPV的相关免疫反应  78-80
  (三) HPV疫苗现状  80-89
  (四) 表达体系与疫苗的形成  89-98
  (五) 重组疫苗的翻译后修饰  98-99
  (六) 小结与展望  99-100
  综述参考文献  100-110
附录：部分序列图谱  110-113
致谢  113-114
个人简历  114-115

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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学 > 病毒性皮肤病 > 疣 > 尖锐湿疣
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