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蚊抗药性相关基因克隆与功能研究及用RNAi抑制蚊抗药性的初步研究

作　者: 公茂庆
导　师: 朱昌亮
学　校: 南京医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 淡色库蚊溴氰菊酯杀虫剂抗性细胞色素P450 胰蛋白酶糜蛋白酶分子克隆逆转录PCR cDNA末端快速扩增稳定表达双连RNA RNA干扰 MTT实验细胞存活率流式细胞绿色荧光蛋白
分类号: R346
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 288次
引　用: 6次
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内容摘要

媒介昆虫严重危害人类健康,据估计传染病中2/3由媒介昆虫传播。世界史上许多危害严重的虫媒传染病如鼠疫、斑疹伤寒、黄热病、疟疾等都曾造成广泛的流行并夺去成千上万人的生命。当今世界随着人类交往的日益频繁,发现许多新的和重新出现的虫媒传染病。化学防治一直是媒介综合治理的主要方法。杀虫剂的大量、连续使用导致了媒介抗药性的发生和发展。目前,世界范围内至少已有504种昆虫产生了抗药性,包括主要的媒介昆虫,其中109种(亚种)蚊对一种或多种杀虫剂产生了抗性。杀虫剂抗性直接影响着虫媒传染病的流行和重新流行,因此,研究媒介抗药性产生的机制并进行适宜治理实乃当务之急。本研究拟从克隆抗药性相关基因入手,并对其进行功能鉴定,然后运用RNAi技术抑制抗药性基因,为探讨最终治理媒介抗药性奠定基础。为此,本文进行了以下几个方面的研究。第一部分淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因的分子克隆与功能研究研究一淡色库蚊细胞色素P450 CYP6F1基因的分子克隆、序列分析及表达差异鉴定为克隆淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因并对其进行表达差异的鉴定,本研究采用RT-PCR技术和RACE策略,从淡色库蚊(Culex pipiens pallens)对溴氰菊酯抗性品系4龄幼虫中克隆细胞色素P450基因(CYP6F1),用相应的软件进行生物信息学分析,并用定量PCR和半定量RT-PCR分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达差异鉴定。结果表明,成功克隆出CYP6F1基因及其等位基因CYP6F1v1。CYP6F1基因全长1639 bp,

全文目录

一.摘要  5-16
  1.中文摘要  5-10
  2.英文摘要  10-16
二.前言  16-19
三.研究内容  19-127
  第一部分淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因的分子克隆与功能研究  19-76
    研究一淡色库蚊细胞色素P450 CYP6F1基因的分子克隆、序列分析及表达差异鉴定  19-42
    研究二淡色库蚊细胞色素P450 CYP6F1基因的初步功能研究  42-60
    研究三淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因NYD-Ch和NYD-Tr的初步功能研究  60-76
  第二部分用RNAi抑制蚊抗药性的初步研究  76-127
    研究四外源性dsRNA在蚊细胞中介导的基因沉默  76-88
    研究五用RNAi沉默蚊NYD-Ch和NYD-Tr基因抑制抗药性的初步研究  88-108
    研究六用RNAi沉默蚊细胞色素P450 CYP6家族基因抑制抗药性的初步研究  108-127
四.参考文献  127-137
五.小结  137-139
六.致谢  139-140
七.附录  140-177
  附录一发表的综述  140-157
    RNAi技术及其在寄生虫相关基因功能研究上的应用  140-157
  附录二发表的SCI论文  157-177
    论文一 Serine proteinase over-expression in relation to deltamethrin resistance in culex pipiens pallens  157-167
    论文二 Cloning and over-expression of a cytochrome P450 gene (CYP6F1) from the deltamethrin-resistant mosquito, Culex pipiens pallens  167-177
论文独创性声明  177

蚊抗药性相关基因克隆与功能研究及用RNAi抑制蚊抗药性的初步研究

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