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日本血吸虫重组疫苗粘膜免疫的研究及新基因的克隆

作　者: 黄复深
导　师: 易新元；曾宪芳
学　校: 中南大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫粘膜免疫重组日血吸虫蛋白核酸疫苗链球菌活菌苗免疫保护力成虫cDNA文库免疫筛选
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

目的：探讨日本血吸虫重组蛋白、核酸疫苗、重组链球菌活菌苗粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力及寻找新的疫苗侯选分子的基因。方法： 1、核酸疫苗及重组链球菌活菌苗按常规方法构建。 2、保护试验用动物为BALB/C和昆明系小鼠。分别用rSjFer和rSjGST-CA(佐剂为CTB)，SjTs-1/pc、Sj31/VR1012、SjCA/pc和SjMf1/pc(佐剂为MPL)，SjCA和Sj31表面表达重组活菌苗粘膜免疫3次。第3次免疫后2周，攻击感染40±1条尾蚴，45 d剖杀动物，观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血并收集粪便或唾液，ELISA检测抗体水平。 3、日本血吸虫成虫cDNA文库免疫筛选用血清为重复感染兔血清。三轮筛所获阳性克隆，经辅助噬菌体自动剪切后，进行PCR检测测序，生物信息学分析。结果 1、小鼠免疫后血清中IgA和IgG及粪内或唾液内sIgA水平升高。rSjFer+CTB灌胃和滴鼻免疫的减虫率分别为25.57％和33.35％，每克肝减卵率分别为34.75％和60.10％。rSjGST-CA+CTB滴鼻免疫的减虫率为31.55％，每克肝减卵率为63.34％。 2、SjTs-1/pc、SjCA/pc、Sj31/VR1012和SjMf1/pc滴鼻免疫都可引起小鼠抗体水平增高，核酸疫苗加佐剂滴鼻免疫诱导的抗体滴度高于不加佐剂组。四种疫苗分子都可引起小鼠产生部分抗攻击感染的免疫保护力，核酸疫苗加佐剂滴鼻免疫与不加佐剂组二者的保护力没有明显的区别。 3、重组链球菌滴鼻免疫后，可在小鼠的口腔咽腔内定居，中南大学博士学位论文中文摘要＿并引起小鼠抗体水平增高。Sj CA和 Sj 31表面表达菌滴鼻免疫引起的减虫率和每克肝减卵率分别为为 2 5．5 7％和 3 4．7 5％和 21．7 3％和 3 5．0 7％～ 4、成虫CDNA文库免疫筛选共发现四个日本血吸虫基因，其中三个为新基因IRI、IR2、IR3，其在GenBank的登录号分别为AY 70313，AY173930，AY251481。IR3 为全基因～含897个碱基，编码299个氨基酸，推测等电点kI）为6．21～一分子量（MW）约为5 3．3 KD。一个为日本血吸虫丝氨酸蛋白酶一抑策剂（SPI）基因。结论： 1、rsjFer＋CTB禾 rsjcsr－ca＋ors粘膜免疫能使小鼠产生部分抗攻击感染的保护力～ 2、Ms－1／pc、Sj CA／pc、SJ31／VR1012和SjMfl／pc一粘膜免疫能使小鼠产生部分抗攻击感染的保护力，特别是减一区效果。 3、链球菌活菌苗是血吸虫疫苗研究的一种有效载体一＿ 4、CTB 可提高蛋白疫苗的免疫保护作用。MPL对提高核酸疫苗的免疫保护作用不明显。 5、日本血吸虫成虫的 IRI、IRZ、IR3和 SPI可被重复感染兔血清识别，它们在血吸虫疫苗研究中的价值有待进一步＿研究。

日本血吸虫重组疫苗粘膜免疫的研究及新基因的克隆

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