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壳聚糖—白念菌热休克蛋白90核酸疫苗纳米粒子的制备及其缓释作用初探

作　者: 关丽影
导　师: 房金波；王桂云
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 核酸疫苗 壳聚糖 纳米粒子 免疫应答
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


壳聚糖（CS）是多糖中唯一天然碱性阳离子多聚糖。近年来,因其生物可降解性、生物粘附性、良好的生物相容性,以及较低的细胞毒性而得到广泛应用;壳聚糖在弱酸性溶液中氨基发生质子化,可以与表面带有负电荷的核酸通过静电作用形成纳米级粒子。提高核酸利用度,保护核酸不被酶降解等众多特性,使其作为优良的核酸载体受到广泛关注。本文使用复凝法将壳聚糖与白色念珠菌热休克蛋白90重组质粒(DNAch90)形成纳米粒子,并对其在动物实验中的缓释作用进行初步探讨。1、多种因素对纳米粒子大小及电位产生影响实验结果表明N/P比值、DNAch90浓度、pH值、Na2SO4浓度、水浴温度与纳米粒子粒径大小呈正相关;N/P比值和DNAch90浓度与纳米粒子表面电位呈正相关;pH值、Na2SO4浓度和水浴温度与颗粒表面电位呈负相关。以此优化条件制备CS-DNAch90纳米粒子。2、初步探究CS-DNAch90纳米粒子的理化性质和相关特性测定纳米粒子的形态、粒径大小和分布、表面电位。结果显示制备的纳米粒子大小均一,直径在166nm左右;分散度良好;表面电位也为正值。测量纳米粒子的包封率和载药量。结果显示其包封率高于90%,载药量大于30%;考量了CS浓度对包封率的影响。CS浓度与包封率正相关。凝胶阻滞分析实验说明粒子表面带有正电荷,壳聚糖将DNAch90包裹在颗粒中心;酶保护实验进一步证明,CS-DNAch90纳米粒抵御DNAch90被酶解。3、CS-DNA ch90纳米粒子在动物体内对核酸疫苗的缓释作用以CS-DNAch90纳米粒子为实验材料,采用皮下两点注射的方式免疫ICR小鼠,免疫两次,间隔时间为两周。免疫小鼠抗血清与R-Hsp90蛋白Western Blot结果表明,CS-DNAch90纳米粒子能够使免疫小鼠产生抗R-Hsp90特异性抗体。ELISA检测免疫小鼠抗血清抗R-Hsp90特异性抗体IgG、IgG1及IgG2b含量,CS-DNAch90纳米粒子组的抗体含量远远低于DNA ch90组小鼠抗体含量（P<0.01）,该结果表明CS-DNAch90纳米粒子在动物体内对核酸疫苗起到了明显的缓释作用。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-8
中英文缩写  8-9
第一章 引言  9-15
  1. 壳聚糖研究进展  9-11
  2. 核酸疫苗的研究进展  11-13
  3. 本论文的研究内容及意义  13-15
第二章 实验材料与方法  15-26
  1. 实验材料、仪器  15-16
    1.1 主要材料  15
    1.2 主要试剂  15-16
    1.3 主要实验仪器  16
  2. 实验方法  16-26
    2.1 考察单因素对 CS-DNA_(ch90)粒子的影响  16-20
    2.2 优化条件制备CS-DNA_(ch90)纳米粒子  20
    2.3 CS-DNAch90 纳米粒子形态表征  20
    2.4 CS-DNAch90 纳米粒子粒径和表面电位  20
    2.5 CS-DNAch90 纳米粒子包封率、载药量  20-22
    2.6 CS-DNAch90 纳米粒子凝胶阻滞分析  22
    2.7 CS-DNAch90 纳米粒子酶保护实验  22
    2.8 小鼠免疫方案  22-23
    2.9 免疫小鼠抗血清特异性抗R-Hsp90 抗体检测  23-24
    2.10 免疫小鼠抗血清抗 R-Hsp90 抗体含量检测  24-26
第三章 结果与分析  26-40
  1. CS-DNA_(ch90)纳米粒子的制备  26-32
    1.1 单因素对CS-DNA_(ch90)纳米粒子的影响  26-31
    1.2 CS-DNA_(ch90)纳米粒子的制备  31-32
  2. CS-DNA_(ch90)纳米粒子特性检测  32-36
    2.1 CS-DNA_(ch90)纳米粒子形态表征  32
    2.2 CS-DNA_(ch90)纳米粒子粒径和表面电位  32-33
    2.3 CS-DNA_(ch90)纳米粒子包封率、载药量  33-35
    2.4 凝胶阻滞结果分析  35-36
    2.5 酶保护结果分析  36
  3. CS-DNA_(ch90)纳米粒子缓释作用初探  36-40
    3.1 免疫小鼠抗血清抗 R-Hsp90 特异性抗体检测  36-37
    3.2 免疫小鼠抗血清抗 R-Hsp90 特异性抗体含量检测  37-40
第四章 讨论  40-43
结论  43-44
参考文献  44-47
致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学 > 免疫生物学
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